粪肠球菌对小鼠血脑屏障通透性及脑组织损伤相关因素的研究

发布时间：2022-10-17 16:03

　　粪肠球菌是人和动物体内正常菌群的重要组成部分,随着抗生素的持续大量使用,粪肠球菌的耐药性普遍提高,是一种重要的条件致病菌,能引起人和动物感染性疾病的发生,威胁着人类健康和畜牧业的健康发展。如今,粪肠球菌感染动物造成脑膜炎的病例逐年增多,而粪肠球菌是如何穿越对多种物质具有选择透过性的血脑屏障而进入脑部,并对脑组织造成损伤的机制却鲜有报道。因此,本研究在前期工作基础上,选择从患有脑膜炎的羔羊脑组织中分离到的2株粪肠球菌XJ3、XJ8为研究对象,探究其对小鼠血脑屏障造成的损伤,并查明小鼠脑组织损伤程度与氧化应激反应相关指标SOD、MDA以及p38MAPK信号通路的相关性,为今后的研究提供参考。目的:（1）建立2株粪肠球菌感染小鼠脑部模型并评估。（2）检测小鼠血脑屏障相关指标AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5的表达量情况,分析2株粪肠球菌对血脑屏障造成的损伤程度。（3）研究2株粪肠球菌对小鼠脑部氧化应激反应相关指标SOD、MDA的变化,判断粪肠球菌对脑组织的损伤作用。（4）探究致羔羊脑膜炎粪肠球菌与小鼠脑内p38MAPK信号通路的相关性,为研究粪肠球菌穿越血脑屏障的感染机制奠定... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词对照表
第一章 绪论
    1 粪肠球菌研究进展
        1.1 粪肠球菌生物学特性
        1.2 粪肠球菌的致病性
            1.2.1 粪肠球菌对人的致病性
            1.2.2 粪肠球菌引起动物的疾病
        1.3 粪肠球菌的致病机制
    2 血脑屏障的研究进展
        2.1 血脑屏障的概念
        2.2 血脑屏障的结及构功能
        2.3 影响血脑屏障通透性和脑组织损伤的因素
            2.3.1 Claudin-5 对血脑屏障通透性的影响
            2.3.2 MMP-2 对血脑屏障通透性的影响
            2.3.3 AQP4 对血脑屏障通透性的影响
            2.3.4 GFAP对血脑屏障通透性的影响
            2.3.5 SOD和 MDA对血脑屏障通透性及脑组织损伤的影响
    3 p38MAPK信号通路与脑损伤的相关性
第二章 试验内容
    试验一 2株粪肠球菌穿越小鼠血脑屏障感染模型的构建及评估
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器
            1.3 菌株来源
            1.4 实验动物
        2 方法
            2.1 粪肠球菌感染模型的建立
                2.1.1 菌液的平板计数
                2.1.2 2 株粪肠球菌LD_0和LD_(100) 的测定
                2.1.3 2 株粪肠球菌LD_(50) 的确定
                2.1.4 小鼠感染模型的建立
                2.1.5 细菌的回收鉴定
                2.1.6 粪肠球菌16S rRNA的检测
            2.2 利用EB检测血脑屏障开放状况
                2.2.1 伊文思蓝染色
                2.2.2 冰冻切片制作
            2.3 统计分析
        3 结果
            3.1 2 株粪肠球菌感染模型的建立
                3.1.1 2株粪肠球菌LD_(50) 的测定
                3.1.2 两株菌株LD_(50) 的计算
                3.1.3 细菌分离培养及涂片染色镜检结果
                3.1.4 特异性片段扩增
                3.1.5 感染小鼠临床症状的观察
            3.2 EB检测小鼠血脑屏障开放情况结果
        4 讨论
        5 小结
    试验二 对小鼠血脑屏障通透性主要结构相关指标AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5 的分析
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验仪器
            1.3 试验动物
            1.4 试验菌株
        2 方法
            2.1 动物模型的制备及样品的采集
            2.2 qRT-PCR检测AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5 基因表达量
                2.2.1 脑组织总RNA的提取
                2.2.2 反转录
                2.2.3 目的基因引物的合成
                2.2.4 qRT-PCR反应体系及扩增程序
                2.2.5 实时荧光定量PCR结果分析
            2.3 免疫组织化学测定MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP的表达
            2.4 统计分析
        3 结果
            3.1 动物模型制备结果
            3.2 脑组织中MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP基因水平变化
            3.3 脑组织中MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP蛋白表达变化
                3.3.1 AQP4 表达的免疫组化的动态观察
                3.3.3 小鼠脑组织中GFAP免疫组化染色结果
                3.3.4 Claudin-5 蛋白的表达
                3.3.4 MMP-2 蛋白的表达
        4 讨论
        5 小结
    试验三 对小鼠脑损伤中氧化应激反应相关指标SOD、MDA的检测
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验仪器
            1.3 菌株来源
            1.4 实验动物
        2 方法
            2.1 两菌株感染小鼠模型的制备
            2.2 小鼠血清中SOD和 MDA的测定
            2.3 统计分析
        3 结果
            3.1 小鼠脑部损伤模型的构建
            3.2 小鼠血清中MDA和 SOD的测定
        4 讨论
        5 小结
    试验四 对参与小鼠血脑屏障损伤机制p38MAPK信号通路的探究
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 试验仪器
            1.3 菌株来源
            1.4 实验动物
        2 方法
            2.1 两株菌株感染小鼠模型的制备
            2.2 Western-blot检测p-p38、p38 蛋白的表达量
                2.2.1 脑组织蛋白的提取
                2.2.2 Western-blot法检测p-p38、p38 蛋白表达量
            2.3 数据统计
        3 结果
            3.1 小鼠脑部模型的构建
            3.2 考马斯亮蓝染色结果
            3.4 p-p38 的蛋白表达变化
        4 讨论
        5 小结
全文总结
创新点
参考文献
致谢
作者简历
课题来源
在校期间发表文章
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表


【参考文献】：
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本文编号：3692373