弓形虫假定TCP-1蛋白质的克隆表达及功能的初步研究

发布时间：2022-10-27 20:28

　　背景:刚地弓形虫简称弓形虫（Toxoplasma gondii,T.gondii）,是一种只寄生在有细胞核的细胞内,在世界各地均有发现的人兽共患寄生原虫。弓形虫能够感染几乎所有的恒温脊椎动物,包括人在内,人和动物被感染后可引起弓形虫病。该病不仅给畜牧业造成严重的经济损失,也给人类健康带来潜在的威胁。目前尚无特效疫苗和药物来预防或治疗该病。目的:本课题通过对弓形虫与唾液酸受体结合的全蛋白质组的初步分析,选取唾液酸结合蛋白质假定TCP-1进行后续研究。关于弓形虫假定TCP-1蛋白质的研究目前尚未见有任何报道。本研究对其是否与唾液酸结合进行了体外验证,从而探究弓形虫依赖唾液酸途径侵入宿主细胞的机理,为研制新的抗弓形虫药物提供新的方向。方法:纯化弓形虫RH株速殖子,Biozol法提取总RNA,反转录成cDNA后进行PCR扩增。回收目的片段,回收产物克隆至T载体中,转化至大肠杆菌感受态,提取质粒测序,测得的序列进行生物信息学分析。构建原核表达载体表达蛋白质,利用亲和层析法纯化重组蛋白质,SDS-PAGE和Western-blot验证纯化的重组蛋白质。HIS-TCP-1蛋白质与弗氏佐剂乳化,免疫S... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 弓形虫生活特性
        1.1.1 病原
        1.1.2 形态学
        1.1.3 生活史
    1.2 弓形虫入侵机制
        1.2.1 入侵过程
        1.2.2 入侵过程相关蛋白质
        1.2.3 宿主表面相关受体
    1.3 分子伴侣
        1.3.1 分子伴侣分类及功能
        1.3.2 TCP-1与各种疾病相关
        1.3.3 TCP-1与寄生虫病相关
    1.4 本研究的目的及意义
第二章 假定TCP-1蛋白质基因的克隆与生物信息学分析
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果及分析
        2.3.1 弓形虫(RH株)总RNA提取
        2.3.2 TGME49_318410基因全长扩增
        2.3.3 生物信息学分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 假定TCP-1蛋白质原核表达载体构建、表达、纯化及多克隆抗体的制备
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果及分析
        3.3.1 重组质粒双酶切验证
        3.3.2 重组蛋白质的小量表达
        3.3.3 两种标签重组蛋白质的纯化与验证
        3.3.4 血清抗体效价检测及IgG纯化
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 假定TCP-1蛋白质在弓形虫虫体亚细胞定位
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果及分析
        4.3.1 弓形虫全虫蛋白验证
        4.3.2 RH株速殖子假定TCP-1蛋白质的亚细胞定位
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 假定TCP-1蛋白质与唾液酸入侵途径相关功能分析
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3 结果及分析
        5.3.1 假定TCP-1蛋白质与唾液酸结合实验
        5.3.2 GST-TCP-1蛋白质与细胞黏附实验
        5.3.3 抗体IgG抑虫结果
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]检测犬弓形虫SAG3抗体间接ELISA方法的建立[J]. 宋慧琦,杨升,高珺珊,宫鹏涛,李建华,张西臣.  中国病原生物学杂志. 2016(04)
[2]福建貓及兔體內弓形體的發現[J]. 于恩庶,陳黛西,林師敬.  微生物学报. 1957(01)

博士论文
[1]疟原虫TatD-like DNase的功能分析及与虫体致病性的相关性分析[D]. 常志广.吉林大学 2016
[2]底物激酶调控热休克蛋白90α分子伴侣功能的机理研究[D]. 鲁薪安.清华大学 2015



本文编号：3697163