亚细亚酸对猪卵母细胞及早期胚胎体外发育影响的研究

发布时间：2022-10-29 10:24

　　猪卵母细胞的体外成熟及早期胚胎的体外培养技术是开展家畜胚胎发育研究和胚胎工程操作的重要内容。但是与体内获取的卵母细胞和胚胎相比,体外获得的卵母细胞与胚胎发育质量差是目前遇到的一大问题,因为在卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养过程中容易受到自由基等多种其它因素的影响。亚细亚酸是一种从积雪草中分离出来的五环三萜烯,它的主要功能基团包括三个羟基,一个不饱和键以及一个羧基。有研究表明,亚细亚酸具有多种药理活性,包括抗凋亡、抗衰老、抗炎症、抗氧化等。但是亚细亚酸对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响还未有报道,因此本研究旨在探究亚细亚酸对猪卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外培养的影响及其可能的作用机制。具体内容如下:实验一:在猪卵母细胞体外成熟过程中补充亚细亚酸,研究其对卵母细胞体外成熟的影响。从卵巢中采集GV期的卵母细胞,进行42-44h的成熟培养后,统计MⅡ期卵母细胞的成熟率,结果显示,补充亚细亚酸组的卵母细胞的成熟率与对照组相比有小幅度提升但无显著差异。将卵母细胞进行PA及IVF处理后,发现在体外成熟期间补充亚细亚酸可显著提高早期胚胎的发育能力,且囊胚的质量也有显著提高。同时对卵母细胞的抗氧化... 

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
前言
文献综述
    第一章 卵母细胞及早期胚胎氧化应激的研究进展
        1.1 氧化应激
        1.2 氧化应激对卵母细胞质量的影响
        1.3 氧化应激对早期胚胎发育的影响
    第二章 亚细亚酸的研究进展
        2.1 亚细亚酸的药理特性
        2.2 亚细亚酸药物应用研究
        2.3 亚细亚酸对氧化应激的缓解作用
第二篇 研究内容
    第一章 亚细亚酸对猪卵母细胞体外成熟的影响
        1.1 实验材料
            1.1.1 卵母细胞来源
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
            1.1.4 实验用液制备
        1.2 实验方法
            1.2.1 卵母细胞的收集及成熟培养
            1.2.2 卵母细胞的药物处理
            1.2.3 卵母细胞的孤雌激活
            1.2.4 早期胚胎的培养
            1.2.5 体外受精
            1.2.6 卵母细胞ROS、GSH染色
            1.2.7 β-半乳糖苷酶染色
            1.2.8 卵丘颗粒细胞的收集
            1.2.9 流式细胞术检测卵丘颗粒细胞ROS和 GSH水平
            1.2.10 流式细胞术检测卵丘颗粒细胞凋亡情况
            1.2.11 Hoechst33342 染色
            1.2.12 卵母细胞JC-1 染色
            1.2.13 统计分析
        1.3 实验结果
            1.3.1 亚细亚酸对卵母细胞成熟率的影响
            1.3.2 亚细亚酸对孤雌激活早期胚胎发育率的影响
            1.3.3 亚细亚酸对体外受精胚胎发育的影响
            1.3.4 亚细亚酸对卵母细胞抗氧化能力的影响
            1.3.5 亚细亚酸对卵母细胞线粒体的影响
            1.3.6 亚细亚酸对卵母细胞衰老的影响
            1.3.7 亚细亚酸对卵丘细胞的影响
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 亚细亚酸对猪早期胚胎体外发育的影响
        2.1 实验材料
            2.1.1 卵母细胞及猪成纤维细胞来源
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验用液制备
        2.2 实验方法
            2.2.1 卵母细胞的收集及成熟培养
            2.2.2 成纤维细胞分离
            2.2.3 细胞培养
            2.2.4 体细胞核移植
            2.2.5 体外受精
            2.2.6 早期胚胎培养
            2.2.7 早期胚胎ROS、GSH水平的检测
            2.2.8 早期胚胎的JC-1 染色
            2.2.9 Hoechst33342 染色
            2.2.10 RNA提取
            2.2.11 RNA的反转录
            2.2.12 实时光定量PCR
        2.3 实验结果
            2.3.1 亚细亚酸对孤雌胚胎发育率的影响
            2.3.2 亚细亚酸对孤雌胚胎囊胚质量的影响
            2.3.3 亚细亚酸对孤雌胚胎细胞内抗氧化能力的影响
            2.3.4 亚细亚酸对孤雌胚胎线粒体的影响
            2.3.5 亚细亚酸对核移植胚胎发育率及质量的影响
            2.3.6 亚细亚酸对核移植胚胎基因调控的影响
            2.3.7 亚细亚酸对体外受精胚胎发育率及质量的影响
        2.4 讨论
        2.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介及在学期间所取得的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]体外胚胎培养是胚胎工程技术的关键环节[J]. 李楠,林忠.  中国组织工程研究. 2019(29)
[2]氧化应激对生殖健康的影响[J]. 马文倩,霍正浩,刘春莲.  宁夏医学杂志. 2019(04)
[3]猪胚胎发育与胚胎工程研究进展[J]. 郭诗萌,刘世超,刘忠华.  中国畜牧杂志. 2017(09)
[4]Asiatic acid inhibits lung cancer cell growth in vitro and in vivo by destroying mitochondria[J]. Tiancong Wu,Ji Geng,Wenjie Guo,Jing Gao,Xixu Zhu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(01)
[5]氧化还原信号和氧化应激/还原应激[J]. 周宗灿.  毒理学杂志. 2015(01)

硕士论文
[1]AAPH诱导小鼠早期胚胎氧化应激的分子机制及谷胱甘肽抗氧化作用的研究[D]. 刘雅贤.内蒙古大学 2016



本文编号：3697513