基因缺失天坛株痘苗病毒弱毒载体的构建及鉴定

发布时间：2022-10-30 19:41

　　痘苗病毒具有宿主范围广泛、高效蛋白表达、免疫原性较好、基因组容量大、基因操作简单和人用历史悠久等特点，在科研领域得到广泛应用。以痘苗病毒作载体表达外源蛋白，需要将外源性蛋白编码基因插入到痘苗病毒载体基因组中，构建出重组痘苗病毒，然后在特有的启动子作用下，在细胞内表达外源蛋白。选取痘苗病毒复制非必需基因区域作为插入位点，根据同源重组原理，将外源基因重组到痘苗病毒基因组中，然后在细胞内复制并包装成感染性病毒。从痘苗病毒基因组中靶向缺失大量宿主范围基因、毒力相关基因等病毒复制非必需基因，构建天坛株痘苗病毒弱毒载体，达到既减弱病毒毒力、还缩小宿主范围防止病毒扩散的目的，从而构建一株安全、高效的痘苗病毒载体。 天坛株痘苗病毒是在中国分离得到的特有的痘苗病毒毒株，病毒毒力相对较弱。本研究通过对痘苗病毒天坛株全基因组序列及其病毒毒力相关基因进行分析，筛选了7段与病毒毒力、宿主范围等功能相关的病毒复制非必需基因进行敲除，以达到减弱病毒毒力、缩小宿主范围的目的。同源重组过程中利用增强型的绿色荧光蛋白作为外源性筛选标记，以及胸苷激酶作为内源性筛选标记，然后运用Cre/Loxp系统完成EGFP基因的敲... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
第一篇 文献综述
    第一章 痘苗病毒免疫逃避
        1.1 痘苗病毒概述
        1.2 VACV 免疫调节蛋白及其参与的逃脱免疫的相关机制
        1.3 VACV 免疫调节蛋白对病毒毒力和免疫原性的影响
    第二章 痘苗病毒载体的应用
        2.1 VACV 作为动物传染病疫苗载体
        2.2 VACV 作为人类传染病疫苗载体
        2.3 VACV 作为肿瘤免疫治疗载体
        2.4 VACV 作为溶瘤癌症治疗载体
        2.5 VACV 的在不同研究领域的应用发展前景
第二篇 实验研究
    第一章 重组质粒的构建及鉴定
        1.1 材料
        1.2 实验方法
        1.3 实验结果
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 基因缺失天坛株痘苗病毒弱毒载体的构建及鉴定
        2.1 材料
        2.2 实验方法
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 基因缺失型重组痘苗病毒 TTVAC7 的毒力分析
        3.1 材料
        3.2 实验方法
        3.3 实验结果
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
英文缩略词表
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选[J]. 王宇航,李霄,王浩然,阚式绂,王卓越,齐延新,吴娜,杜寿文,金宁一.  中国兽医学报. 2011(11)
[2]痘苗病毒天坛株基因组旁侧区结构及开放读码框架的分析[J]. 金奇,陈南海,姚二梅,黄静,侯云德.  病毒学报. 1997(01)



本文编号：3699363