山东省部分地区鸭养殖屠宰链中产气荚膜梭菌的分离鉴定及基因分型
发布时间：2022-11-06 18:46
产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是一种重要的人畜共患病原微生物,不仅可以导致家禽的坏死性肠炎（NE）,给养殖业造成巨大的经济损失,还能够引起人食物中毒等消化道疾病,给人的健康带来一定的威胁。随着抗生素的广泛使用,产气荚膜梭菌对抗生素的耐药性不断增强,多重耐药现象明显,严重影响了抗生素的临床治疗效果。家禽是产气荚膜梭菌的主要宿主,其屠宰加工过程中往往会被产气荚膜梭菌污染。虽然各国对不同宿主及食品中产气荚膜梭菌的流行状况开展了较为系统的研究,但关于家禽养殖屠宰链中产气荚膜梭菌的报道还相对匮乏,中国是世界上最大的肉鸭生产国,山东是养鸭大省,因此对山东地区鸭养殖及屠宰过程中产气荚膜梭菌的流行情况、血清型分布、耐药性以及遗传演化规律进行研究,不仅可以填补鸭源产气荚膜梭菌流行情况研究的空缺,为养殖场合理使用抗生素提供理论依据,同时对评估公共卫生和食品安全也具有重要意义。2018年12月至2019年6月,从潍坊地区某养殖屠宰一体化公司的肉鸭养殖屠宰链以及泰安、聊城、潍坊地区四个鸭场的鸭养殖阶段采集样品共计939份,经选择培养基分离培养后,用PCR扩增鉴定产气荚膜梭菌8种...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 产气荚膜梭菌简介
1.2 产气荚膜梭菌的血清分型
1.3 产气荚膜梭菌的毒力基因
1.4 产气荚膜梭菌的流行情况
1.4.1 产气荚膜梭菌在家禽养殖场中的流行情况
1.4.2 产气荚膜梭菌在禽产品中的流行情况
1.5 禽源产气荚膜梭菌耐药研究现状
1.6 多位点序列分型
1.7 研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 样品
2.1.2 菌株
2.1.3 培养基
2.1.4 主要试剂及溶液配制
2.1.5 抗生素
2.1.6 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 样品处理
2.2.2 产气荚膜梭菌的分离与鉴定
2.2.3 菌种保存及DNA提取
2.2.4 血清型鉴定
2.2.5 毒力基因检测
2.2.6 药敏试验
2.2.7 多位点序列分型(MLST)
2.2.7.1 管家基因引物合成
2.2.7.2 管家基因的PCR扩增及测序
2.2.7.3 MLST分型及系统发育分析
2.2.8 统计分析和辛普森多样性指数
3 结果
3.1 产气荚膜梭菌的鉴定结果
3.1.1 菌落形态
3.1.2 镜检结果
3.1.3 产气荚膜梭菌PCR鉴定结果
3.2 产气荚膜梭菌的分离结果
3.2.1 鸭养殖场中产气荚膜梭菌的阳性率
3.2.2 肉鸭屠宰环节中产气荚膜梭菌的阳性率
3.3 血清型分型结果
3.4 毒力基因检测结果
3.4.1 产气荚膜梭菌毒力基因PCR扩增结果
3.4.2 产气荚膜梭菌毒力基因流行情况
3.5 产气荚膜梭菌药敏试验结果
3.5.1 产气荚膜梭菌耐药率统计
3.5.1.1 养殖场分离株的耐药率
3.5.1.2 屠宰场分离株的耐药率
3.5.2 产气荚膜梭菌多重耐药情况
3.6 多位点序列分型(MLST)
3.6.1 管家基因PCR扩增结果
3.6.2 MLST序列型(ST)
3.6.3 MLST最小生成树
3.6.3.1 鸭养殖场分离株的最小生成树
3.6.3.2 从养殖到屠宰生产链中分离株的最小生成树
3.7 产气荚膜梭菌的系统进化结果
3.7.1 鸭养殖场分离株的系统发育树
3.7.2 从养殖到屠宰生产链中分离株的系统发育树
4 讨论
4.1 产气荚膜梭菌流行情况分析
4.1.1 养殖场中产气荚膜梭菌的流行情况分析
4.1.2 屠宰场中产气荚膜梭菌的流行情况分析
4.2 产气荚膜梭菌毒力基因分析
4.3 产气荚膜梭菌耐药情况分析
4.4 产气荚膜梭菌MLST分型
4.4.1 养殖场中产气荚膜梭菌的MLST分析
4.4.2 肉鸭从养殖到屠宰过程中产气荚膜梭菌的MLST分析
4.5 产气荚膜梭菌系统发育分析
5 结论
6 创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]北京市某职业学校一起食源性疾病暴发的调查[J]. 郑兰紫,冯月明,周国营,王化勇. 中国公共卫生管理. 2018(01)
[2]澳门地区鸡源产气荚膜梭菌的污染情况及基因分型[J]. 陆宗浩,黄慧怡,梁晓君,吴志君,李婉芬. 中国人兽共患病学报. 2018(03)
[3]郑州市熟肉制品中产气荚膜梭菌污染状况调查[J]. 王小慧,魏法山,赵莉君,牛会敏,李苗云,柳艳霞,赵改名. 中国食品卫生杂志. 2017(02)
[4]冷鲜鸡产气荚膜梭菌及其毒素的潜在危害分析[J]. 马壮,彭新宇,叶得河,高彪,袁明贵,尹烨华,徐志宏. 广东农业科学. 2016(08)
[5]一起由快餐盒饭引发的产气荚膜梭菌食物中毒[J]. 刘秀峰,陈东宛,吕金昌,高彭,李永进. 中国卫生检验杂志. 2016(11)
[6]魏氏梭菌外毒素的研究进展[J]. 许崇利. 河南师范大学学报(自然科学版). 2016(01)
[7]陕西省部分地区鸡源A型产气荚膜梭菌分离株的药敏试验[J]. 姜艳芬,纪文静,许晗. 动物医学进展. 2015(10)
[8]不同地区鸡源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和药敏试验[J]. 胡贺,覃宗华,王艳华,龚振兴,刘保红,殷昊,彭险峰,马雪婷,李祥瑞,蔡建平. 畜牧与兽医. 2015(10)
[9]SPF鸡粪菌移植与发酵床饲养模式下肉鸡生产性能和抗药性研究[J]. 李运喜,骆延波,宋敏训,冯敏燕,林树乾,刘军伟,郭文龙,刘玉庆,刘焕奇. 山东农业科学. 2015(05)
[10]鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 艾地云,邵华斌,张腾飞,詹丽超,罗玲,张蓉蓉,汪宏才,王红琳,罗青平,温国元. 动物医学进展. 2014(06)
硕士论文
[1]山东省泰安市零售鸭产品中产气荚膜梭菌的分离鉴定、基因分型及耐药性研究[D]. 刘煜.山东农业大学 2019
[2]山东省泰安市不同来源的鸡产气荚膜梭菌分离鉴定、耐药性及基因分型研究[D]. 张汇宁.山东农业大学 2019
[3]广州市冷鲜鸡产气荚膜梭菌的污染分析及netB菌株的致病性研究[D]. 马壮.甘肃农业大学 2016
[4]规模化鸡场健康鸡群产气荚膜梭菌的分离、鉴定及遗传多样性研究[D]. 郑晓丽.四川农业大学 2009
本文编号：3704028
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 产气荚膜梭菌简介
1.2 产气荚膜梭菌的血清分型
1.3 产气荚膜梭菌的毒力基因
1.4 产气荚膜梭菌的流行情况
1.4.1 产气荚膜梭菌在家禽养殖场中的流行情况
1.4.2 产气荚膜梭菌在禽产品中的流行情况
1.5 禽源产气荚膜梭菌耐药研究现状
1.6 多位点序列分型
1.7 研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 样品
2.1.2 菌株
2.1.3 培养基
2.1.4 主要试剂及溶液配制
2.1.5 抗生素
2.1.6 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 样品处理
2.2.2 产气荚膜梭菌的分离与鉴定
2.2.3 菌种保存及DNA提取
2.2.4 血清型鉴定
2.2.5 毒力基因检测
2.2.6 药敏试验
2.2.7 多位点序列分型(MLST)
2.2.7.1 管家基因引物合成
2.2.7.2 管家基因的PCR扩增及测序
2.2.7.3 MLST分型及系统发育分析
2.2.8 统计分析和辛普森多样性指数
3 结果
3.1 产气荚膜梭菌的鉴定结果
3.1.1 菌落形态
3.1.2 镜检结果
3.1.3 产气荚膜梭菌PCR鉴定结果
3.2 产气荚膜梭菌的分离结果
3.2.1 鸭养殖场中产气荚膜梭菌的阳性率
3.2.2 肉鸭屠宰环节中产气荚膜梭菌的阳性率
3.3 血清型分型结果
3.4 毒力基因检测结果
3.4.1 产气荚膜梭菌毒力基因PCR扩增结果
3.4.2 产气荚膜梭菌毒力基因流行情况
3.5 产气荚膜梭菌药敏试验结果
3.5.1 产气荚膜梭菌耐药率统计
3.5.1.1 养殖场分离株的耐药率
3.5.1.2 屠宰场分离株的耐药率
3.5.2 产气荚膜梭菌多重耐药情况
3.6 多位点序列分型(MLST)
3.6.1 管家基因PCR扩增结果
3.6.2 MLST序列型(ST)
3.6.3 MLST最小生成树
3.6.3.1 鸭养殖场分离株的最小生成树
3.6.3.2 从养殖到屠宰生产链中分离株的最小生成树
3.7 产气荚膜梭菌的系统进化结果
3.7.1 鸭养殖场分离株的系统发育树
3.7.2 从养殖到屠宰生产链中分离株的系统发育树
4 讨论
4.1 产气荚膜梭菌流行情况分析
4.1.1 养殖场中产气荚膜梭菌的流行情况分析
4.1.2 屠宰场中产气荚膜梭菌的流行情况分析
4.2 产气荚膜梭菌毒力基因分析
4.3 产气荚膜梭菌耐药情况分析
4.4 产气荚膜梭菌MLST分型
4.4.1 养殖场中产气荚膜梭菌的MLST分析
4.4.2 肉鸭从养殖到屠宰过程中产气荚膜梭菌的MLST分析
4.5 产气荚膜梭菌系统发育分析
5 结论
6 创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]北京市某职业学校一起食源性疾病暴发的调查[J]. 郑兰紫,冯月明,周国营,王化勇. 中国公共卫生管理. 2018(01)
[2]澳门地区鸡源产气荚膜梭菌的污染情况及基因分型[J]. 陆宗浩,黄慧怡,梁晓君,吴志君,李婉芬. 中国人兽共患病学报. 2018(03)
[3]郑州市熟肉制品中产气荚膜梭菌污染状况调查[J]. 王小慧,魏法山,赵莉君,牛会敏,李苗云,柳艳霞,赵改名. 中国食品卫生杂志. 2017(02)
[4]冷鲜鸡产气荚膜梭菌及其毒素的潜在危害分析[J]. 马壮,彭新宇,叶得河,高彪,袁明贵,尹烨华,徐志宏. 广东农业科学. 2016(08)
[5]一起由快餐盒饭引发的产气荚膜梭菌食物中毒[J]. 刘秀峰,陈东宛,吕金昌,高彭,李永进. 中国卫生检验杂志. 2016(11)
[6]魏氏梭菌外毒素的研究进展[J]. 许崇利. 河南师范大学学报(自然科学版). 2016(01)
[7]陕西省部分地区鸡源A型产气荚膜梭菌分离株的药敏试验[J]. 姜艳芬,纪文静,许晗. 动物医学进展. 2015(10)
[8]不同地区鸡源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和药敏试验[J]. 胡贺,覃宗华,王艳华,龚振兴,刘保红,殷昊,彭险峰,马雪婷,李祥瑞,蔡建平. 畜牧与兽医. 2015(10)
[9]SPF鸡粪菌移植与发酵床饲养模式下肉鸡生产性能和抗药性研究[J]. 李运喜,骆延波,宋敏训,冯敏燕,林树乾,刘军伟,郭文龙,刘玉庆,刘焕奇. 山东农业科学. 2015(05)
[10]鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 艾地云,邵华斌,张腾飞,詹丽超,罗玲,张蓉蓉,汪宏才,王红琳,罗青平,温国元. 动物医学进展. 2014(06)
硕士论文
[1]山东省泰安市零售鸭产品中产气荚膜梭菌的分离鉴定、基因分型及耐药性研究[D]. 刘煜.山东农业大学 2019
[2]山东省泰安市不同来源的鸡产气荚膜梭菌分离鉴定、耐药性及基因分型研究[D]. 张汇宁.山东农业大学 2019
[3]广州市冷鲜鸡产气荚膜梭菌的污染分析及netB菌株的致病性研究[D]. 马壮.甘肃农业大学 2016
[4]规模化鸡场健康鸡群产气荚膜梭菌的分离、鉴定及遗传多样性研究[D]. 郑晓丽.四川农业大学 2009
本文编号：3704028
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