SCAP/SREBP1对FASN基因转录的调控研究

发布时间：2022-11-09 20:15

　　为了阐明奶牛SCAP/SREBP1在肝脏细胞中调控脂肪酸合成酶基因的转录机制,试验以荷斯坦奶牛肝脏组织c DNA为模板,克隆SCAP基因的编码序列,构建pc DNA3.1-SCAP表达载体;利用PCR从奶牛基因组DNA中克隆构建3个不同片段长度的FASN荧光素酶报告基因载体;采用免疫荧光的方法对SCAP以及SREBP1标记,激光共聚焦观察SCAP及SREBP1蛋白的亚细胞定位;并应用实时荧光定量PCR技术检测SCAP基因m RNA的表达;用Western blotting法检测SCAP和核SREBP1蛋白表达;将FASN基因启动子质粒转染至肝脏细胞,并分别转染pc DNA3.1-SREBP1质粒、pc DNA3.1-SCAP质粒以及共转染pc DNA3.1-SREBP1和pc DNA3.1-SCAP质粒作为处理,双荧光素酶检测FASN启动子的活性影响;后期又将FASN基因启动子质粒和pc DNA3.1-SREBP1质粒转染至肝脏细胞,并分别转染不同剂量的pc DNA3.1-SCAP质粒作为处理,双荧光素酶检测FASN启动子的活性影响;在肝脏细胞中分别转染pc DNA3.1-SREBP1... 

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
1 文献综述
    1.1 SCAP/SREBP脂类合成信号通路
        1.1.1 SREBP结构与功能
        1.1.2 SCAP结构与功能
        1.1.3 SCAP介导的SREBPs活化过程
    1.2 脂类合成关键基因(FASN)的研究进展
        1.2.1 脂肪酸合成机理及调控
        1.2.2 脂肪酸合成酶(FASN)的结构与功能
        1.2.3 FASN在SREBP信号通路中的研究与意义
    1.3 脂类代谢疾病研究进展
2 引言
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 细胞培养试剂
        3.1.3 试剂
        3.1.4 仪器
    3.2 方法
        3.2.1 pcDNA3.1-SCAP真核表达载体的构建
        3.2.2 实时荧光定量PCR
        3.2.3 免疫荧光
        3.2.4 FASN基因启动子荧光素酶报告基因载体构建
        3.2.5 荧光素酶报告基因系统FASN启动子活性的检测
        3.2.6 蛋白免疫印迹
        3.2.7 尼罗红染色
        3.2.8 数据分析
4 结果与分析
    4.1 SCAP基因克隆,载体构建及基因表达
        4.1.1 SCAP基因的克隆
        4.1.2 pcDNA3.1-SCAP真核表达载体的构建及鉴定
        4.1.3 SCAP基因在肝脏细胞中mRNA表达情况
    4.2 SCAP及SREBP1蛋白表达及在肝脏细胞中的定位
        4.2.1 SCAP及核SREBP1蛋白表达情况
        4.2.2 SREBP1及SCAP在肝脏细胞中的共定位
    4.3 FASN基因启动子的克隆及转录调控分析
        4.3.1 FASN基因启动子的克隆
        4.3.2 PGL3-FASN报告基因载体的构建及鉴定
        4.3.3 FASN基因启动子生物信息学分析
        4.3.4 不同的处理因素对FASN启动子的转录调控作用
        4.3.5 SCAP依赖SREBP1对FASN启动子的剂量转录调控作用
    4.4 SCAP/SREBP1对SREBP1基因、FASN基因表达及脂滴合成的影响
        4.4.1 SREBP1依赖SCAP促进SREBP1基因的表达
        4.4.2 SREBP1依赖SCAP促进FASN基因的表达
        4.4.3 SCAP/SREBP1对脂质合成的影响
5 讨论与结论
    5.1 讨论
    5.2 结论
参考文献
英文摘要


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国荷斯坦奶牛FASN基因部分序列多态性分析[J]. 任卫合,王丽萍,刘容秀,张丽.  中国草食动物科学. 2017(03)
[2]日粮碳水化合物水平对体内脂肪酸合成酶调控的研究进展[J]. 沙爽,韩蕊,车东升.  黑龙江畜牧兽医. 2017(01)
[3]奶牛SREBP1蛋白在乳腺上皮细胞的表达定位及对SCD1基因启动子的转录调控[J]. 韩立强,王月影,王林枫,朱河水,钟凯,褚贝贝,杨国宇.  中国农业科学. 2016(24)
[4]两种脂肪细胞内脂滴染色方法的比较研究[J]. 秦红霞,赵玲,王宇豪,宁椿游,罗毅.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2014(06)
[5]FASN基因与反刍动物脂肪形成的关系[J]. 吴江鸿,胡斯乐,祁云霞,何小龙,王晓光,刘永志,孙海莲,王峰.  畜牧与兽医. 2013(07)
[6]固醇调节元件结合蛋白1及其靶基因网络[J]. 汤晓丽,邓立彬,林加日,张伟龙,刘双梅,魏懿,梅普明,汪雁,梁尚栋.  遗传. 2013(05)
[7]山羊SREBP-1基因的超表达对脂肪酸代谢相关基因表达的影响[J]. 许会芬,罗军,李芳,余康,石恒波,李君,林先滋,朱江江.  生物工程学报. 2012(11)
[8]动物脂肪酸合成酶基因表达调控的研究进展[J]. 张力莉,徐晓锋.  畜牧与兽医. 2012(04)
[9]脂肪酸合成酶基因的研究进展[J]. 罗建学,李春风,初晓辉,谷大海,黎小青,徐志强.  中国畜牧兽医. 2011(06)
[10]西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子的克隆及活性测定[J]. 张晓,罗军,李建华,赵旺生,王伟.  中国农业科学. 2010(03)

博士论文
[1]Insig-1/SCAP/SREBP-1c通路对内质网应激下肝细胞脂质代谢的影响[D]. 房殿亮.重庆医科大学 2013

硕士论文
[1]腺病毒介导的SREBP-1c过表达对奶牛肝细胞脂肪沉积的影响[D]. 杨文涛.吉林大学 2013
[2]西农萨能羊脂肪酸合酶（FASN）基因启动子结构和功能研究[D]. 李君.西北农林科技大学 2011
[3]西农萨能羊乳腺脂肪酸合酶（FAS）基因及其启动子的克隆、测序与分析[D]. 王海滨.西北农林科技大学 2007



本文编号：3704822