ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能研究

发布时间：2022-12-04 01:55

　　旨在探究缺失、小的、同源异形1（absent, small, or homeotic 1-like,ASH1L）甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能。本研究通过免疫荧光染色在健康母牛卵丘细胞中对ASH1L甲基转移酶进行定位,并分析细胞的组蛋白H3第36位赖氨酸（histone H3 lysine36, H3K36）甲基化修饰模式;合成靶向Ash1L基因的siRNA,对siRNA-1、 siRNA-2、siRNA-3及对照组进行荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹,筛选有效siRNA;采用荧光定量PCR分析干扰Ash1L表达对处理组及对照组中凋亡相关基因及多梳抑制复合体（polycomb repressive complex 2, PRC2）组成基因的表达水平的影响。结果显示,ASH1L甲基转移酶位于牛卵丘细胞的细胞核中,呈点状分布。成功筛选到能有效干扰牛Ash1L基因的siRNA-2,其干扰效率为60%～70%。将siRNA-2转染卵丘细胞后,该干扰组细胞中H3K36的单甲基化、二甲基化及三甲基化3种甲基化水平均显著低于对照组（P＜0.05）;干扰Ash1L导致凋亡相关基因Bax、Bcl-2... 

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 牛卵母细胞的体外成熟
    1.3 牛卵丘细胞培养
    1.4 Ash1L siRNAs的设计与合成
    1.5 牛体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎的制备和胚胎注射
    1.6 细胞转染
    1.7 实时荧光定量PCR
    1.8 免疫荧光染色
    1.9 蛋白质免疫印迹
    1.10 数据分析
2 结 果
    2.1 牛卵丘细胞的培养
    2.2 Ash1L基因及其蛋白在卵丘细胞中的表达
    2.3 牛卵丘细胞中H3K36甲基化修饰状态
    2.4 牛Ash1L基因有效siRNA序列的筛选及干扰效率检测
    2.5 干扰Ash1L基因对卵丘细胞中H3K36甲基化状态的影响
    2.6 干扰Ash1L基因对凋亡相关基因及PRC2蛋白基因表达的影响
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin协同褪黑素、PI3K信号通路对猪卵巢颗粒细胞发育的影响[D]. 杨有福.西北农林科技大学 2018



本文编号：3707387