健康与腹泻仔猪肠道菌群差异研究及猪源乳酸杆菌的筛选
发布时间：2022-12-04 10:08
仔猪腹泻是仔猪消化功能紊乱的综合症状，会引发继发感染，致使仔猪抵抗力降低，死亡率增高，严重危害着养猪业的发展。本研究以健康和腹泻仔猪粪便为研究对象，利用传统培养技术，对仔猪肠道总细菌，双歧杆菌，乳酸杆菌，肠球菌，大肠杆菌进行计数；利用PCR-DGGE技术对肠道菌群和乳酸杆菌菌群多样性进行分析；并从健康仔猪的新鲜粪便中分离筛选乳酸杆菌。同时对所筛选菌株进行耐酸，耐胆盐，产乳酸能力和对大肠杆菌、沙门氏菌有无抑制作用进行检测，筛选出性能优良的益生乳酸杆菌。 1、腹泻组与健康组相比，肠道菌群中的总细菌数，双歧杆菌数，乳酸杆菌数均有下降，其中21日龄仔猪肠道总细菌数差异极显著，21日龄仔猪肠道乳酸杆菌数以及7、21日龄仔猪肠道双歧杆菌数差异显著。大肠杆菌数，腹泻组较健康组均有上升，但差异不显著。肠球菌数，7日龄仔猪腹泻组较健康组有所上升，其它日龄组仔猪腹泻组较健康组均有所下降，但差异都不显著。 2、仔猪肠道菌群复杂程度与菌群失调严重程度关系密切且与日龄有关，不同日龄健康仔猪肠道菌群的DGGE指纹图谱随着日龄的增加逐渐变得复杂，聚类分析表明断奶前后基本分为两个族。腹泻组DGGE指纹图谱...
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 肠道微生物与宿主消化道的关系
1.2 动物肠道正常菌群的功能
1.2.1 肠道菌群对肠道发育的影响
1.2.2 营养与消化功能
1.2.3 肠道菌群的生物拮抗作用
1.2.4 免疫作用
1.3 研究肠道菌群的分子生物学新技术
1.3.1 变性/温度梯度凝胶电泳
1.3.2 其它分子生物学技术
1.4 仔猪肠道菌群形成
1.5 益生乳酸杆菌对仔猪肠道菌群的影响
1.6 本研究的背景及意义
第二章 健康与腹泻仔猪肠道菌群差异研究
2.1 材料
2.1.1 仪器设备
2.1.2 药品、酶及引物
2.1.3 试剂
2.2 方法
2.2.1 样品采集
2.2.2 细菌计数
2.2.3 仔猪肠道菌群的 PCR-DGGE 菌群多样性分析方法的建立
2.2.4 仔猪肠道菌群 DGGE 指纹图谱分析
2.2.5 仔猪肠道乳酸杆菌的 PCR-DGGE 菌群多样性分析方法的建立
2.2.6 仔猪肠道乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱分析
2.2.7 乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱特殊条带割胶测序
2.3 结果
2.3.1 细菌计数结果
2.3.2 肠道总细菌 DNA 的提取
2.3.3 样品中总细菌的 16S rDNA PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
2.3.4 健康和腹泻仔猪肠道菌群 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.5 不同猪场健康和腹泻仔猪肠道菌群 DGGE 及 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.6 仔猪肠道乳酸杆菌 16S rDNA 套式 PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
2.3.7 不同日龄健康和腹泻仔猪肠道乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.8 目的条带割胶、回收、克隆、测序结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 猪源乳酸杆菌的分离鉴定及筛选
3.1 材料
3.1.1 仪器设备
3.1.2 药品
3.1.3 试剂
3.1.4 指示菌
3.2 方法
3.2.1 样品的采集
3.2.2 乳酸杆菌的分离、镜检和纯化
3.2.3 乳酸杆菌抗逆性筛选
3.2.4 乳酸杆菌的属、种生化鉴定
3.2.5 乳酸杆菌益生特性研究
3.2.6 菌种的保存
3.3 结果
3.3.1 分离乳酸杆菌结果
3.3.2 乳酸杆菌耐酸性试验结果
3.3.3 乳酸杆菌耐胆盐试验结果
3.3.4 乳酸杆菌属、种的生化鉴定
3.3.5 乳酸杆菌产乳酸试验结果
3.3.6 乳酸杆菌体外拮抗试验结果
3.4 讨论与小结
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCR-DGGE技术在哺乳动物胃肠道微生物多样性及菌群结构研究中的应用[J]. 葛铮,赵晗旭,高云航,马红霞,张福君. 动物医学进展. 2013(12)
[2]乳酸杆菌益生作用机制的研究进展[J]. 章文明,汪海峰,刘建新. 动物营养学报. 2012(03)
[3]仔猪胃肠道微生物菌群定植规律及其功能的研究进展[J]. 张柏林,秦贵信,孙泽威,刘宁,赵元,王涛. 中国畜牧杂志. 2009(19)
[4]戊糖乳杆菌制剂防治仔猪腹泻效果初探[J]. 张丽芳,王占武. 中国微生态学杂志. 2008(06)
[5]国内饲用抗生素替代品的研究简况[J]. 吕桂霞,李春蕾,曹雁行,薄宏斌. 兽药与饲料添加剂. 2008(04)
[6]猪源乳酸杆菌对仔猪某些疾病的影响研究[J]. 张丽萍,王永生. 河南畜牧兽医(综合版). 2008(04)
[7]肠道菌群与仔猪腹泻的相互关系[J]. 王书凤. 饲料博览(技术版). 2007(04)
[8]2株耐酸及耐胆盐嗜酸乳杆菌的分离筛选及其发酵特性研究[J]. 王玉华,张桂荣,刘景圣. 东北师大学报(自然科学版). 2006(03)
[9]16S rDNA技术研究新生腹泻仔猪粪样细菌区系的多样性变化[J]. 姚文,朱伟云,毛胜勇. 微生物学报. 2006(01)
[10]2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究[J]. 吴惠芬,毛胜勇,姚文,朱伟云. 华中农业大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]不同外源扰动因素对肠道菌群组成结构影响的研究[D]. 魏华.上海交通大学 2008
[2]仔猪复合益生乳酸杆菌制剂及其作用机理的研究[D]. 黄沧海.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]健康与腹泻仔猪粪样菌群的比较及猪源肠道丁酸产生菌的分离[D]. 谢飞.南京农业大学 2011
[2]猪用乳酸杆菌、双歧杆菌、纳豆芽孢杆菌复合活菌制剂的研制[D]. 刘宇.黑龙江八一农垦大学 2008
[3]猪源乳酸菌益生素的研制及其应用[D]. 舒会友.湖南农业大学 2005
本文编号：3708058
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 肠道微生物与宿主消化道的关系
1.2 动物肠道正常菌群的功能
1.2.1 肠道菌群对肠道发育的影响
1.2.2 营养与消化功能
1.2.3 肠道菌群的生物拮抗作用
1.2.4 免疫作用
1.3 研究肠道菌群的分子生物学新技术
1.3.1 变性/温度梯度凝胶电泳
1.3.2 其它分子生物学技术
1.4 仔猪肠道菌群形成
1.5 益生乳酸杆菌对仔猪肠道菌群的影响
1.6 本研究的背景及意义
第二章 健康与腹泻仔猪肠道菌群差异研究
2.1 材料
2.1.1 仪器设备
2.1.2 药品、酶及引物
2.1.3 试剂
2.2 方法
2.2.1 样品采集
2.2.2 细菌计数
2.2.3 仔猪肠道菌群的 PCR-DGGE 菌群多样性分析方法的建立
2.2.4 仔猪肠道菌群 DGGE 指纹图谱分析
2.2.5 仔猪肠道乳酸杆菌的 PCR-DGGE 菌群多样性分析方法的建立
2.2.6 仔猪肠道乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱分析
2.2.7 乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱特殊条带割胶测序
2.3 结果
2.3.1 细菌计数结果
2.3.2 肠道总细菌 DNA 的提取
2.3.3 样品中总细菌的 16S rDNA PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
2.3.4 健康和腹泻仔猪肠道菌群 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.5 不同猪场健康和腹泻仔猪肠道菌群 DGGE 及 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.6 仔猪肠道乳酸杆菌 16S rDNA 套式 PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
2.3.7 不同日龄健康和腹泻仔猪肠道乳酸杆菌 DGGE 指纹图谱分析结果
2.3.8 目的条带割胶、回收、克隆、测序结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 猪源乳酸杆菌的分离鉴定及筛选
3.1 材料
3.1.1 仪器设备
3.1.2 药品
3.1.3 试剂
3.1.4 指示菌
3.2 方法
3.2.1 样品的采集
3.2.2 乳酸杆菌的分离、镜检和纯化
3.2.3 乳酸杆菌抗逆性筛选
3.2.4 乳酸杆菌的属、种生化鉴定
3.2.5 乳酸杆菌益生特性研究
3.2.6 菌种的保存
3.3 结果
3.3.1 分离乳酸杆菌结果
3.3.2 乳酸杆菌耐酸性试验结果
3.3.3 乳酸杆菌耐胆盐试验结果
3.3.4 乳酸杆菌属、种的生化鉴定
3.3.5 乳酸杆菌产乳酸试验结果
3.3.6 乳酸杆菌体外拮抗试验结果
3.4 讨论与小结
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCR-DGGE技术在哺乳动物胃肠道微生物多样性及菌群结构研究中的应用[J]. 葛铮,赵晗旭,高云航,马红霞,张福君. 动物医学进展. 2013(12)
[2]乳酸杆菌益生作用机制的研究进展[J]. 章文明,汪海峰,刘建新. 动物营养学报. 2012(03)
[3]仔猪胃肠道微生物菌群定植规律及其功能的研究进展[J]. 张柏林,秦贵信,孙泽威,刘宁,赵元,王涛. 中国畜牧杂志. 2009(19)
[4]戊糖乳杆菌制剂防治仔猪腹泻效果初探[J]. 张丽芳,王占武. 中国微生态学杂志. 2008(06)
[5]国内饲用抗生素替代品的研究简况[J]. 吕桂霞,李春蕾,曹雁行,薄宏斌. 兽药与饲料添加剂. 2008(04)
[6]猪源乳酸杆菌对仔猪某些疾病的影响研究[J]. 张丽萍,王永生. 河南畜牧兽医(综合版). 2008(04)
[7]肠道菌群与仔猪腹泻的相互关系[J]. 王书凤. 饲料博览(技术版). 2007(04)
[8]2株耐酸及耐胆盐嗜酸乳杆菌的分离筛选及其发酵特性研究[J]. 王玉华,张桂荣,刘景圣. 东北师大学报(自然科学版). 2006(03)
[9]16S rDNA技术研究新生腹泻仔猪粪样细菌区系的多样性变化[J]. 姚文,朱伟云,毛胜勇. 微生物学报. 2006(01)
[10]2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究[J]. 吴惠芬,毛胜勇,姚文,朱伟云. 华中农业大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]不同外源扰动因素对肠道菌群组成结构影响的研究[D]. 魏华.上海交通大学 2008
[2]仔猪复合益生乳酸杆菌制剂及其作用机理的研究[D]. 黄沧海.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]健康与腹泻仔猪粪样菌群的比较及猪源肠道丁酸产生菌的分离[D]. 谢飞.南京农业大学 2011
[2]猪用乳酸杆菌、双歧杆菌、纳豆芽孢杆菌复合活菌制剂的研制[D]. 刘宇.黑龙江八一农垦大学 2008
[3]猪源乳酸菌益生素的研制及其应用[D]. 舒会友.湖南农业大学 2005
本文编号：3708058
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3708058.html
