雄性小鼠生殖轴组织中AURKA表达定位及敲低后对双氢睾酮合成代谢的影响

发布时间：2022-12-04 14:58

　　极光激酶A （aurora kinase A, AURKA）是细胞周期有丝分裂调节蛋白激酶之一,参与调控生殖细胞的发生和成熟。研究表明AURKA是雄激素受体（androgen receptor, AR）的靶基因,双氢睾酮（dihydrotestosterone, DHT）与胞内AR结合后促进精子成熟。因此,探究AURKA与DHT的作用机制对雄性动物生殖及相关疾病的研究有重要意义,但其具体作用及机制尚不完全清楚。本研究采集8周龄昆明雄性小鼠（Mus musculus）下丘脑、垂体和睾丸组织生殖轴器官组织,通过半定量PCR、免疫印迹（Western blot, WB）、苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining, HE）和免疫组化学染色（immunohistochemistry,IHC）,探究AURKA在雄性小鼠性腺轴的表达规律及定位。设计AURKA-siRNA干扰序列,转染原代成年小鼠睾丸支持细胞,利用实时荧光定量PCR （real-time fluorescent quantitative PCR, q RT-PCR）和WB检测转染24 h后,细胞AURKA... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 试剂
    1.3 方法
        1.3.1 总RNA的提取及反转录
        1.3.2 引物设计
        1.3.3 半定量PCR
        1.3.4 实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)
        1.3.5 免疫印迹(Western blot,WB)
        1.3.6 苏木精-伊红染色及免疫组化
        1.3.7 细胞转染过程
        1.3.8 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno-sorbent assay,ELISA)
        1.3.9 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 雄性小鼠下丘脑-垂体-睾丸组织中AURKA的表达规律
    2.2 雄性小鼠下丘脑-垂体-睾丸组织中AURKA表达定位
    2.3 小鼠睾丸支持细胞转染AURKA-siRNA对AURKA表达效率的影响
    2.4 小鼠睾丸支持细胞转染AURKA-siRNA对SRD5A1的影响
    2.5 小鼠睾丸支持细胞转染AURKA-siRNA后DHT含量变化
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]成年小鼠睾丸支持细胞体外快速分离与培养[J]. 胡旭燕,伍琼芳,张学宏.  江西医药. 2018(03)
[2]miRNAs介导下丘脑-垂体-性腺轴调控动物生殖的研究进展[J]. 曹素梅,万雪萍,严美姣,李昂,吴旭.  中国畜牧杂志. 2017(01)
[3]小鼠睾丸支持细胞的体外分离、培养与鉴定[J]. 周德荣,郑俊鸿,杨庆涛,高琼,彭友彬.  汕头大学医学院学报. 2011(03)
[4]Aurora激酶A、B在小鼠受精卵第一次有丝分裂进程中的表达与定位[J]. 许琳,王国丽,戴维亚,刘彤,武迪迪,于秉治,张杰.  生殖与避孕. 2011(04)
[5]睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析[J]. 余振东,蔡志明,唐爱发,桂耀庭.  中国男科学杂志. 2007(01)
[6]5α-还原酶在良性前列腺增生发展中的作用[J]. 张骞,虞巍,金杰.  中国男科学杂志. 2005(01)



本文编号：3708476