N蛋白羧基端融合外源表位的小反刍兽疫病毒的构建和研究

发布时间：2022-12-05 04:19

　　小反刍兽疫是（Peste des petits ruminants，PPR）由小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminantsvirus，PPRV）引起的小反刍动物的一种接触性传染性疾病，发病率和死亡率分别可高达100%和90%。自1942年首次发现后，PPR传播迅速，给流行地区带来重大经济损失。该病无特效治疗方法，主要以疫苗免疫预防为主。目前广泛应用的PPR弱毒疫苗虽然具有良好的效果，但不能区分自然感染和疫苗免疫，干扰PPR的血清学监测。而标记疫苗（differentiate infected from vaccinatedanimals vaccine，DIVA疫苗）则可以弥补这一缺点，因此标记疫苗（DIVA疫苗）的研究具有重要的意义。 PPRV属于副粘病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus），基因组为不分节段的负链RNA，其核衣壳（nucleocapsid，N）蛋白是PPRV含量最丰富和免疫原性最强的结构蛋白，动物机体感染后可引起强烈的抗体反应进而产生高滴度抗体，该抗体虽不具有中和病毒的能力，但具有重要的诊断意义。... 

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
图目录
英文缩略表
第一章 文章综述
    1.1 小反刍兽疫概述
        1.1.1 PPR 流行病学
        1.1.2 PPR 危害
    1.2 PPRV 生物学特性
        1.2.1 PPRV 形态结构
        1.2.2 PPRV 基因组结构特点
        1.2.3 PPRV N 蛋白
    1.3 PPRV 疫苗研究进展
        1.3.1 PPRV 疫苗研究
        1.3.2 PPRV 反向遗传操作研究进展
    1.4 研究的目的和意义
第二章 试验部分
    2.1 实验材料
        2.1.1 病毒与细胞
        2.1.2 质粒
        2.1.3 试验动物和高免血清
        2.1.4 主要试剂和仪器
        2.1.5 引物设计合成
    2.2 方法
        2.2.1 表达外源表位基因的重组病毒基因组全长 cDNA 的构建
        2.2.2 融合外源表位对 N 蛋白功能的影响
        2.2.3 表达融合外源表位 N 蛋白的重组病毒的拯救
        2.2.4 重组病毒的 RT-PCR 鉴定
        2.2.5 蛋白免疫印迹检测
        2.2.6 间接免疫荧光试验
        2.2.7 重组病毒的生长动力学分析
        2.2.8 重组病毒 rPPRV/GFP/5B19 的小鼠免疫试验
    2.3 结果
        2.3.1 表达外源表位基因的重组病毒基因组全长 cDNA 的构建
        2.3.2 融合外源表位对 N 蛋白功能的影响
        2.3.3 表达融合外源表位重组病毒的拯救及 RT-PCR 鉴定
        2.3.4 蛋白免疫印迹检测
        2.3.5 间接免疫荧光试验
        2.3.6 重组病毒的生长动力学分析
        2.3.7 重组病毒 rPPRV/GFP/5B19 的小鼠免疫试验结果
    2.4 讨论
第三章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国首例小反刍兽疫诊断报告[J]. 王志亮,包静月,吴晓东,刘雨田,李林,刘佩兰,赵永刚,刘春菊,肖肖.  中国动物检疫. 2007(08)
[2]一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立[J]. 包静月,李林,王志亮,李金明,刘春菊,肖肖.  中国动物检疫. 2007(08)



本文编号：3709667