H5亚型禽流感疫苗诱导下鹅TLR4作用的研究

发布时间：2022-12-09 02:53

　　Toll样受体属于天然免疫因子,在感染初期通过识别病原体相关分子模式,启动信号传递发挥抗感染作用,从而清除病原微生物的侵害。鹅是我国饲养较多的水禽之一,因生长环境的影响,易发生禽流感等传染性疾病,现有疫苗不能提供全部的保护作用,从天然免疫角度增强抗病性已经成为研究的热点。目前在哺乳动物中对于TLRs的研究较为广泛,在禽类中尤其是鹅TLR4的研究较少。本试验拟对三花鹅TLR4基因胞外区进行克隆和序列分析,在H5亚型禽流感疫苗诱导下,采用免疫组织化学方法和半定量PCR技术对三花鹅TLR4及相关免疫因子的表达情况进行初步分析,探究TLR4免疫功能发生机制,结果如下:（1）克隆三花鹅TLR4基因胞外区片段,大小为998 bp,编码304个氨基酸残基;与已知朗德鹅序列比对发现,共有9个核苷酸突变位点,导致2个氨基酸位点发生改变。核苷酸及氨基酸进化树分析发现,三花鹅TLR4与朗德鹅和马岗鹅同源性最高,在禽类中较为保守,与哺乳类、鱼类等同源性较低,具有种属特异性。（2）构建三花鹅TLR4胞外区重组表达载体,表达的重组蛋白大小约为38 kD;利用切胶纯化方法获得特异性蛋白免疫家兔,得到兔抗鹅TLR4胞... 

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 Toll样受体的概述
        1.1.1 Toll样受体的发现
        1.1.2 Toll样受体作用的分子机制
        1.1.3 Toll样受体的组织分布
    1.2 哺乳动物TLRs的研究进展
        1.2.1 哺乳动物TLRs的分子特征
        1.2.2 哺乳动物TLRs的生物学功能
    1.3 家禽TLRs的研究进展
        1.3.1 家禽TLRs的分子结构
        1.3.2 家禽TLRs的生物学功能
        1.3.3 鹅Toll样受体4的分子生物学研究
    1.4 禽流感的研究进展
        1.4.1 流行情况
        1.4.2 疫苗的研究
        1.4.3 相关免疫因子的影响
        1.4.4 病理变化
    1.5 研究目的及意义
第2章 三花鹅TLR4基因胞外区的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 载体、菌株和相对分子质量
        2.1.3 引物
        2.1.4 主要仪器设备
        2.1.5 主要生化试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 三花鹅TLR4基因胞外区的克隆
        2.2.2 重组原核表达载体的构建
        2.2.3 三花鹅TLR4胞外区多克隆抗体的制备
        2.2.4 生物信息学分析
    2.3 结果
        2.3.1 三花鹅肝组织RNA的提取
        2.3.2 三花鹅TLR4 基因胞外区RT-PCR扩增
        2.3.3 重组质粒p MD18-T-TLR4 的鉴定
        2.3.4 重组表达质粒p ET-32a-TLR4ER的鉴定
        2.3.5 表达产物的检测
        2.3.6 三花鹅TLR4胞外区初级结构特征
        2.3.7 三花鹅TLR4蛋白胞外区高级结构特征
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 三花鹅TLR4基因及相关免疫因子在不同组织的表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物及样品处理
        3.1.2 主要生化试剂
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 引物
    3.2 实验方法
        3.2.1 鹅TLR4基因及相关免疫因子的检测
        3.2.2 鹅TLR4的免疫组织化学检测
    3.3 结果
        3.3.1 鹅TLR4基因及相关免疫因子的检测
        3.3.2 鹅TLR4在不同组织中的分布
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3714668