MicroRNA-378调控猪骨骼肌生长发育的机制研究

发布时间：2022-12-09 23:31

　　MicroRNAs（miRNAs）是一类小分子RNA（21-24nt）,通过与靶标基因的非编码区（3’UTR）互补结合,导致nRNA降解或阻断mRN翻译,从而调控转录后水平基因表达。猪作为主要肉品提供者,首先关注的就是肌肉发育,肌肉形成是成肌细胞退出细胞周期、表达肌肉特异性基因并阻止其他组织特异性基因表达的一个过程。本课题组前期研究结果发现：ssc-miR-378在背肌和心肌的表达量明显高于其它组织；并且发现ssc-miR-378表达变化情况与肌纤维表达量变化相一致。本研究旨在继续开展有关：miR.378调控猪骨骼肌生长发育的研究,探究miR-378在骨骼肌生长发育过程中的生物学功能,找出：miR-378引起变化的下游基因及其参与的信号通路,揭示产肉性状的分子机制,为miRNAs口骨骼肌发育的研究提供资料。 利用Targetscan网站共预测出191个靶基因,结合DAVID生物信息学软件筛选与肌肉发育相关的潜在靶基因：骨形成蛋白2（Bone morphogenetic protein2, BMP2）和丝源活化蛋白激酶1（Mitogen-activated protein kina... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 骨骼肌的发育机制
        1.1 骨骼肌的发生
        1.2 骨骼肌的形成
        1.3 成年肌的再生
        1.4 影响肌肉生成的调控因子
    2 microRNA的特征
        2.1 miRNA的发现和命名
        2.2 miRNA的成熟机制
        2.3 miRNA的作用机制
        2.4 miRNA的生物学功能
    3 肌肉发育相关miRNAs的研究进展
    4 miRNA靶基因的预测与验证
        4.1 miRNA靶基因的预测
        4.2 miRNA模拟物(mimics)
        4.3 双荧光素酶报告验证靶基因
        4.4 qPCR检测miRNA在转录水平上对靶基因的调控
    5 研究目的与意义
第二章 材料与方法
    1 材料
        1.1 实验样品与采集
        1.2 主要仪器与设备
        1.3 试剂耗材
        1.4 溶液试剂的配置
        1.5 生物信息学网站与分析软件
        1.6 实验设计方案
    2 方法
        2.1 实验样品采集
        2.2 引物设计
        2.3 实验中应注意的事项
        2.4 miR-378靶基因的选定
        2.5 引物设计
        2.6 DNA的提取
        2.7 PCR扩增MAPK1 3'UTR和BMP2 3'UTR
        2.8 构建正常靶标载体
        2.9 突变载体的构建
        2.10 PK15和PIEC细胞的培养
        2.11 mimics与靶标载体共转染
        2.12 双荧光素酶报告验证靶基因
        2.13 转录水平上验证靶基因MAPK1和BMP2
        2.14 BMP2和MAPK1的生物信息学分析
第三章 结果与分析
    1 miR-378靶基因的选定
        1.1 Targetscan预测miR-378靶基因结果
        1.2 基因的聚类分析筛选靶基因
        1.3 MAPK1和BMP2结合位点的保守性分析
    2 DNA质量检测结果
    3 PCR扩增目的片段
    4 构建正常靶标载体
        4.1 正常靶标载体psi-Check2-MAPK1 3'UTR的构建
        4.2 正常靶标载体Psi-Check2-BMP2 3'UTR的构建
    5 mimics和靶标载体共转染
        5.1 猪肾细胞PK15共转染结果
        5.2 猪血管内皮细胞PIEC转染结果
    6 双荧光素酶报告基因系统检测结果
        6.1 双荧光素酶报告基因系统验证靶标基因MAPK1
        6.2 双荧光素酶报告基因系统验证靶标基因BMP2
    7 RNA质量检测结果
    8 qPCR结果
    9 推测miR-378调控肌肉发育的机制
第四章 讨论
    1 靶标验证
    2 有关miR-378研究的讨论
    3 有关miR-378调控BMP2和MAPKl的讨论
第五章 结论
参考文献
英文缩略表
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA与肿瘤[J]. 周凡,庄诗美.  生命科学. 2008(02)
[2]转录因子MEF2对多种信号通路的调节及其生物学作用[J]. 张文炜,徐列明.  中国生物化学与分子生物学报. 2004(04)



本文编号：3715588