毕赤酵母表达犬长效干扰素融合蛋白的研究
发布时间：2022-12-10 09:46
干扰素有着抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种极具医疗价值的功效。而体内半衰期短的缺点却严重限制着它的临床应用。人医临床上常用人血清白蛋白与干扰素的融合蛋白方式来延长干扰素半衰期,而动物临床上却没有这种融合蛋白长效干扰素开发应用的报道。同时现有的动物干扰素制品大都采用原核表达方式表达生产,其产品在活性和成本方面都不理想。而酵母表达系统是一种真核表达系统,其所表达的蛋白产物修饰合理,活性高。毕赤酵母的分泌表达会把目的蛋白分泌到培养液上清中,而其它杂质蛋白很少,更加有利于目的蛋白的分离纯化,有利于降低目的蛋白的生产成本。所以本实验用毕赤酵母表达系统分泌表达了犬血清白蛋白与犬alpha干扰素的融合蛋白,以此来探索应用血清白蛋白融合蛋白技术来制备犬长效干扰素的可行性。 实验共分四个主体部分,首先是表达质粒的构建,用反转录PCR法从犬组织器官中扩增出犬血清白蛋白cDNA,再对犬血清白蛋白cDNA进行修饰,首先去掉终止密码子的同时在5’端加入EcoR Ⅰ酶切位点,在3’端加入柔性Linker碱基链和BamH Ⅰ酶切位点,再对改造后的cDNA进行点突变,以此来消除不利于质粒构建的两个Bg1Ⅱ酶...
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
第一篇 文献综述
第一章 干扰素的研究现状
1.1 干扰素的分类
1.2 干扰素的作用方式
1.3 动物干扰素
1.4 干扰素作用的影响因素
第二章 血清白蛋白作为运输载体的研究进展
第三章 蛋白表达系统
3.1 大肠杆菌表达系统
3.2 昆虫细胞杆状病毒表达系统
3.3 哺乳动物细胞表达系统
3.4 酵母表达系统
第四章 实验内容及意义
第二篇 研究内容
第一章 融合蛋白毕赤酵母表达质粒的构建
1.1 引言
1.2 材料和方法
1.3 结果
1.4 讨论
1.5 小结
第二章 表达犬长效干扰素融合蛋白重组毕赤酵母菌的构建
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.3 结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 犬长效干扰素融合蛋白的诱导表达及纯化
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.3 结果
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 犬长效干扰素融合蛋白的生物学活性检测
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.3 结果
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
附录
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]IFN-λs的最新研究进展[J]. 惠希武,陈虹,黄秉仁. 中国生物工程杂志. 2010(04)
[2]人干扰素epsilon（IFN-ε）研究进展[J]. 李莉莉,郑凡,张振龙. 微生物学免疫学进展. 2009(03)
[3]犬干扰素的基因工程研究进展[J]. 王艳. 山东畜牧兽医. 2009(03)
[4]干扰素及其临床应用 一 干扰素概述、定义和分类[J]. 侯云德. 中华实验和临床病毒学杂志. 2007(04)
[5]干扰素及其临床应用 二 干扰素的诱生和作用机制[J]. 金冬雁,黎孟枫. 中华实验和临床病毒学杂志. 2007(04)
[6]口服胰岛素制剂的现状和问题[J]. 刘鹏,蒋平,焦炳华. 生命的化学. 2007(06)
[7]RT-PCR法评价干扰素α-2b干粉吸入剂的药效学[J]. 江荣高,王立青,刘衡,王春龙. 中国药学杂志. 2007(22)
[8]猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性[J]. 姚清侠,曹毅,钱平,徐卓菲,何雁南,司有辉,陈焕春. 畜牧兽医学报. 2007(05)
[9]干扰素的分子生物学机制研究进展[J]. 张永. 海峡药学. 2007(01)
[10]人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J]. 唱韶红,巩新,杨志愉,王同映,马国昌,马清钧,吴军. 生物工程学报. 2006(02)
博士论文
[1]家猪干扰素ω及δ基因家族的特征及抗蓝耳病应用研究[D]. 赵欣.复旦大学 2011
[2]γ-干扰素在肝癌免疫逃逸中的作用与机制的研究[D]. 王拱辰.大连医科大学 2010
[3]猪干扰素a和γ在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达及重组蛋白初步应用[D]. 王彦彬.河南农业大学 2008
硕士论文
[1]IFN-τ在绵羊体内外胚胎早期着床中的差异表达研究[D]. 林自力.北京农学院 2010
本文编号：3716529
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
第一篇 文献综述
第一章 干扰素的研究现状
1.1 干扰素的分类
1.2 干扰素的作用方式
1.3 动物干扰素
1.4 干扰素作用的影响因素
第二章 血清白蛋白作为运输载体的研究进展
第三章 蛋白表达系统
3.1 大肠杆菌表达系统
3.2 昆虫细胞杆状病毒表达系统
3.3 哺乳动物细胞表达系统
3.4 酵母表达系统
第四章 实验内容及意义
第二篇 研究内容
第一章 融合蛋白毕赤酵母表达质粒的构建
1.1 引言
1.2 材料和方法
1.3 结果
1.4 讨论
1.5 小结
第二章 表达犬长效干扰素融合蛋白重组毕赤酵母菌的构建
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.3 结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 犬长效干扰素融合蛋白的诱导表达及纯化
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.3 结果
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 犬长效干扰素融合蛋白的生物学活性检测
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.3 结果
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
附录
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]IFN-λs的最新研究进展[J]. 惠希武,陈虹,黄秉仁. 中国生物工程杂志. 2010(04)
[2]人干扰素epsilon（IFN-ε）研究进展[J]. 李莉莉,郑凡,张振龙. 微生物学免疫学进展. 2009(03)
[3]犬干扰素的基因工程研究进展[J]. 王艳. 山东畜牧兽医. 2009(03)
[4]干扰素及其临床应用 一 干扰素概述、定义和分类[J]. 侯云德. 中华实验和临床病毒学杂志. 2007(04)
[5]干扰素及其临床应用 二 干扰素的诱生和作用机制[J]. 金冬雁,黎孟枫. 中华实验和临床病毒学杂志. 2007(04)
[6]口服胰岛素制剂的现状和问题[J]. 刘鹏,蒋平,焦炳华. 生命的化学. 2007(06)
[7]RT-PCR法评价干扰素α-2b干粉吸入剂的药效学[J]. 江荣高,王立青,刘衡,王春龙. 中国药学杂志. 2007(22)
[8]猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性[J]. 姚清侠,曹毅,钱平,徐卓菲,何雁南,司有辉,陈焕春. 畜牧兽医学报. 2007(05)
[9]干扰素的分子生物学机制研究进展[J]. 张永. 海峡药学. 2007(01)
[10]人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J]. 唱韶红,巩新,杨志愉,王同映,马国昌,马清钧,吴军. 生物工程学报. 2006(02)
博士论文
[1]家猪干扰素ω及δ基因家族的特征及抗蓝耳病应用研究[D]. 赵欣.复旦大学 2011
[2]γ-干扰素在肝癌免疫逃逸中的作用与机制的研究[D]. 王拱辰.大连医科大学 2010
[3]猪干扰素a和γ在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达及重组蛋白初步应用[D]. 王彦彬.河南农业大学 2008
硕士论文
[1]IFN-τ在绵羊体内外胚胎早期着床中的差异表达研究[D]. 林自力.北京农学院 2010
本文编号：3716529
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