两种单增李斯特菌LIPI-1毒力检测方法建立及药敏实验研究

发布时间：2022-12-11 08:18

　　单增李斯特菌（Listeriamonocytogenes, Lm）是一种重要的食源性病原菌,自1926年Murray等从家兔体内首次分离到本病原后,现已呈世界性分布。2002年被WHO列为仅次于大肠杆菌0157、沙门氏菌、志贺氏菌后的第四大重要的食源性致病菌,能引起人和动物脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状,发病率虽低,但死亡率高达30%-70%。不同来源的菌株致病性差异大,有些菌株致病性很强,而另一些菌株毒力较弱甚至无致病性。 抗生素的发现和发展为人类健康做出了巨大的贡献。然而,近20来,越来越多的证据表明,畜牧养殖业滥用抗生素对于细菌耐药性的出现和耐药基因的传播起着重要作用。目前,细菌耐药性和食品安全问题业已引起全球的普遍关注。一向被认为对所有抗生素敏感的李斯特菌属,也表现出向多重耐药发展的趋势。李斯特菌病（listeriosis）相对罕见然而一旦发生,病死率很高,耐药菌株的感染导致治疗困难,治疗期延长,直接医疗负担加重。因而准确及时地早期诊断及合理的抗生素治疗显得尤为重要。 为分析Lm不同毒力菌株重要毒力因子的表达差异,扩增、克隆了N21和Lmo0586这两株不... 

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 单增李斯特菌概述
    1.2 Lm第一毒力岛
        1.2.1 毒力调控蛋白(PrfA)
        1.2.2 溶血素蛋白LLO(hly)
        1.2.3 磷脂酶C(plcA、plcB)
        1.2.4 Mpl蛋白(mpl)
        1.2.5 肌动蛋白聚集蛋白(ActA)
    1.3 李斯特杆菌药物敏感性
        1.3.1 对青霉素的敏感性
        1.3.2 对甲氧苄啶的敏感性
        1.3.3 对链霉素的敏感性
        1.3.4 对红霉素的敏感性
        1.3.5 对多种药物共同敏感性
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌种来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 相关培养液的配制
        2.1.4 主要实验仪器与设备
        2.1.5 主要生物分析软件
    2.2 试验方法
        2.2.1 克隆内参基因gyrB
        2.2.2 李斯特菌毒力基因荧光定量PCR方法建立
        2.2.3 不同毒力菌株毒力基因表达量水平检测
        2.2.4 药物敏感性试验
3 结果
    3.1 内参基因gyrB克隆结果
        3.1.1 PCR扩增结果
        3.1.2 重组质粒PCR鉴定结果
    3.2 建立LIPI-1标准曲线
    3.3 两种毒力菌株mRNA相对表达量检测
    3.4 药物敏感性实验结果
4 讨论
    4.1 第一毒力岛基因表达差异分析
    4.2 药物敏感性差异分析及影响因素分析
        4.2.1 耐药出现的原因分析
        4.2.2 药敏实验的影响因素分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读专业硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]6类抗生素耐药基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中的分布及分析[J]. 林镯,陈永平,叶海油,陆小蒟,阳韬.  中国微生态学杂志. 2012(02)
[2]单增李斯特菌在冷鲜猪肉中的生长预测模型比较[J]. 张培培,刘媛,方春,俞盈,陈健舜,方维焕.  微生物学报. 2011(12)
[3]单增李斯特菌溶血素（LLO）的原核表达及其生物学活性鉴定[J]. 林婷婷,杨晶,李志清,王彩霞,向军俭.  微生物学通报. 2011(06)
[4]猪链球菌四环素耐药性与Tn916接合型转座子的关系[J]. 白雪梅,赵爱兰,张少敏,王忆婷,孙晖,叶长芸.  中国人兽共患病学报. 2010(12)
[5]Caspase-8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用[J]. 佟海侠,陆春伟,王立维,王秋实,张继红.  中国当代儿科杂志. 2010(11)
[6]进口水产品中单增李斯特菌的分子流行病学特点[J]. 梁启平,陈健舜,陈巧妙,劳华均,黄绍棠,方维焕.  微生物学报. 2009(06)
[7]单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析[J]. 谭炳乾,何启盖,肖军,陈焕春.  畜牧兽医学报. 2008(05)
[8]2005年中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药性趋势分析[J]. 杨洋,付萍,郭云昌,刘秀梅.  卫生研究. 2008(02)
[9]李斯特菌毒力因子及其进化[J]. 陈健舜,江玲丽,方维焕.  微生物学报. 2007(04)
[10]单核细胞增生李斯特菌的毒力因子[J]. 祝仁发,叶长芸.  中国食品卫生杂志. 2007(02)

博士论文
[1]单核细胞增多性李斯特菌分子进化与酸应激功能基因组学研究[D]. 陈健舜.浙江大学 2010
[2]单增李斯特菌鸡卵黄抗体的抑菌性能及其机理研究[D]. 隋建新.中国海洋大学 2010
[3]单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性及胶体金试纸研制[D]. 张辉.吉林大学 2008
[4]单核细胞增多性李斯特菌PCR和PCR-ELISA检测方法的建立[D]. 谭炳乾.华中农业大学 2008
[5]单核细胞增多性李斯特菌的主要毒力基因分析及其重组菌构建与免疫原性[D]. 江玲丽.浙江大学 2006

硕士论文
[1]单核增生李斯特菌对于宿主抗病毒能力的影响[D]. 苗晓莉.中国科学技术大学 2011
[2]产单核细胞李氏杆菌actA/plcB双缺失突变株的构建[D]. 刘瑾.南京农业大学 2011
[3]食源性单核增生性李斯特氏菌LIPI-1基因分布和致病力研究[D]. 阎雪.河北农业大学 2010
[4]单核细胞增生李斯特菌毒力基因actA转录调控机制的初步研究和缺失突变株的构建[D]. 张晓莉.华中师范大学 2009
[5]单核细胞增生性李斯特菌Mpl蛋白的原核表达及免疫原性研究[D]. 王璐璐.黑龙江八一农垦大学 2009
[6]淡水水产品中单增李斯特菌双重PCR检测及基因分型[D]. 朱堂明.华中农业大学 2008



本文编号：3718443