表达鸡艾美尔球虫3-1E蛋白乳酸乳球菌免疫保护效果

发布时间：2022-12-11 13:28

　　鸡球虫病是一种由艾美尔球虫引起的肠道疾病,严重影响养禽业的经济效益,传统的化学药物防治导致食物中药物残留,威胁着人类的健康。目前应用的球虫活疫苗存在毒力返强等问题,因此需要一种新型稳定高效的替代方法来控制鸡球虫病。鸡球虫子孢子通过其表面蛋白来识别、黏附并入侵肠黏膜上皮细胞,宿主菌—乳酸菌表达的目的蛋白与入侵的子孢子表面蛋白相似,同时可激发有效保护性免疫应答。乳酸菌作为抗原传递载体已成为疫苗研宄的热点之一 本研究应用L.lactis NZ9000作为宿主菌,将E.tenella子孢子3-1E基因克隆入大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pTX8048中,筛选获得阳性质粒pTX8048-3-1E。将阳性质粒pTX8048-3-1E电转化入￡.lactis NZ9000感受态细胞,经筛选获得重组阳性菌L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E,重组菌经5ng/mL Nisin诱导后,采用Western blot检测目的蛋白的表达。将诱导后1×101。CFU L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E分别于5,6,7、15,16,17、25,26,27曰龄三次口服免疫... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 鸡艾美尔球虫病概述
        1.1.1 鸡球虫病对养禽业危害
        1.1.2 鸡球虫临床症状
        1.1.3 鸡艾美尔球虫生命周期
    1.2 鸡艾美尔球虫入侵宿主细胞
        1.2.1 微线蛋白
        1.2.2 顶膜抗原
        1.2.3 棒状蛋白
        1.2.4 球虫表面蛋白
        1.2.5 3-1 E基因
    1.3 宿主抗球虫免疫应答
    1.4 鸡球虫疫苗研究进展
        1.4.1 鸡球虫活疫苗
        1.4.2 鸡球虫重组疫苗
    1.5 乳酸菌作为疫苗载体的研究进展
        1.5.1 乳酸菌与黏膜免疫
        1.5.2 乳酸菌作为表达载体的优势
        1.5.3 乳酸菌表达方式
        1.5.4 乳酸链球菌素及其表达系统
    1.6 Toll样受体2相关研究进展
    1.7 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 菌株及质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要试验仪器设备
        2.1.4 试验动物与虫种
    2.2 试验方法
        2.2.1 鸡E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的诱导表达
        2.2.2 试验动物分组及取材
        2.2.3 重组乳酸菌免疫保护效果的评估
        2.2.4 脾脏T淋巴细胞增殖试验
        2.2.5 脾脏中IL-2与IFN-Y mRNA表达量检测
        2.2.6 ChTLR2信号通路中相关分子QRT-PCR方法的建立
        2.2.7 ChTLR2及其信号通路中三种相关分子inRNA相对表达量的检测
        2.2.8 数据统计与分析
3 试验结果
    3.1 E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的诱导表达
        3.1.1 E.tenella 3-1E基因的亚克隆
        3.1.2 pTX8048-3-1E载体构建与鉴定
        3.1.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E筛选鉴定
        3.1.4 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E表达蛋白的Western blot鉴定
    3.2 乳酸菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫效果的评估
        3.2.1 体重增重变化
        3.2.2 感染后盲肠病变计分
        3.2.3 卵囊排出减少率
        3.2.4 抗球虫指数ACI
    3.3 重组菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫保护机制
        3.3.1 脾脏T淋巴细胞增殖功能变化
        3.3.2 脾脏IL-2、IFN-γ mRNA表达变化
        3.3.3 ChTLR2信号通路中相关分子QRT-PCR方法的建立
        3.3.4 脾脏ChTLR2信号通路相关分子的mRNA表达变化
4 讨论
    4.1 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的构建与表达
    4.2 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的免疫保护作用
    4.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫后脾脏T淋巴细胞增殖变化
    4.4 脾脏TLR2信号通路相关分子mRNA表达变化
    4.5 脾脏IL-2、IFN-γ变化mRNA表达变化
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]鸡IL-18堆型艾美耳球虫3-1E-α-tubulin增强型核酸疫苗免疫保护机理[D]. 黄小丹.东北农业大学 2012



本文编号：3718861