猪TLR3基因及SP-C、SP-D基因启动子功能分析

发布时间：2022-12-18 10:50

　　猪繁殖与呼吸综合症（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）引起的一种病毒性传染病。PRRS导致妊娠母猪严重繁殖障碍，仔猪高死亡率以及各年龄段尤其是仔猪的呼吸道疾病。有研究表明我国优良地方品种大蒲莲猪对蓝耳病的抗性比西方猪种杜长大杂交猪高。我们分析了感染PRRSV对模式识别受体TLR3（Toll-like receptor3TLR3）mRNA表达的影响；对TLR3基因启动子区进行了克隆；对大蒲莲猪、莱芜猪、长白猪、杜洛克猪四个品种301个样品启动子区的SNPs（Single nucleotide polymorphisms）进行了检测；对TLR3基因的调控进行了初步分析，结果表明： 1.通过NCBI数据库将猪的TLR3基因氨基酸序列与该基因其他物种氨基酸序列进行比对，发现其和哺乳动物（包括人、猴、马、小鼠、狗、绵羊、牛、黑猩猩）的同源性较高，其次是鸡，而与斑马鱼的同源性较低。 2.利用RT-PCR进行表达谱分析，结果显示，TLR3基因在肝、肾、胃、脾、脾中均有明显的表达，而... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
1 前言
    1.1 猪繁殖与呼吸综合征
        1.1.1 PRRSV 生物学特征
        1.1.2 PRRS 流行病学
        1.1.3 PRRSV 致病机理
        1.1.4 PRRSV 免疫学反应
    1.2 模式识别受体
    1.3 Toll 样受体 3 基因研究进展
        1.3.1 Toll 样受体的研究进展
        1.3.2 Toll 样受体 3 基因
        1.3.3 基因启动子区单核苷酸多态
    1.4 猪对 PRRSV 抗性差异的研究进展
    1.5 肺泡表面活性物质研究进展
    1.6 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物
        2.1.2 样品采集
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 主要试剂及来源
        2.1.5 主要数据库及生物信息学软件
        2.1.6 常用试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 引物序列及 Tm 值
        2.2.2 猪组织基因组 DNA 提取
        2.2.3 总 RNA 的提取
        2.2.4 反转录获得 cDNA
        2.2.5 猪 TLR3 实时荧光定量 PCR
        2.2.6 猪 TLR3 基因的 mRNA 表达分析
        2.2.7 猪 TLR3 基因 5′调控区分析
        2.2.8 猪 TLR3 启动子区 SNPs 检测
        2.2.9 猪 SP-C、SP-D 肺组织特异性启动子获得
    2.3 统计分析
3 结果与分析
    3.1 总 RNA 的提取
        3.1.1 总 RNA 的检测
        3.1.2 总 RNA 反转录 cDNA
    3.2 猪 TLR3 基因的功能研究
        3.2.1 TLR3 基因部分编码区的克隆与同源性分析
        3.2.2 猪 TLR3 基因的 mRNA 表达分析
        3.2.3 猪 TLR3 基因在攻毒前后 mRNA 表达分析
    3.3 猪 TLR3 基因表达调控
        3.3.1 猪 TLR3 基因启动子区荧光素酶表达载体构建
        3.3.2 猪 TLR3 基因启动子删除试验
        3.3.3 猪 TLR3 基因启动子不同长度片段荧光素酶活性检测
        3.3.4 猪 TLR3 基因启动子的生物信息学分析
        3.3.5 猪 TLR3 基因启动子 mutPRE 定点突变
        3.3.6 猪 TLR3 启动子 SNPs 检测
    3.4 猪 SP-C、SP-D 肺组织特异性表达
        3.4.1 猪 SP-C、SP-D 启动子的获得
        3.4.2 猪 SP-C、SP-D 红色荧光蛋白表达载体构建
        3.4.3 猪 SP-C、SP-D 基因启动子肺组织特异性检测
4 讨论
    4.1 猪 TLR3 基因启动子功能研究
    4.2 猪 SP-C、SP-D 基因启动子功能研究
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理及其抗病育种研究进展[J]. 陈婧瑶,刘小娟,王宇航,李笠,胡晓湘,李宁.  畜牧兽医学报. 2013(11)
[2]猪繁殖与呼吸综合征[J]. 杨汉春,刘承栋,宋洵.  今日畜牧兽医. 2013(08)
[3]信号分子TRIF的研究进展[J]. 解鸿翔,周红.  细胞与分子免疫学杂志. 2012(02)
[4]猪对PRRSV易感性差异的研究进展[J]. 丰秀静,曹少先,孟春花,刘铁铮,王锋.  畜牧与兽医. 2010(12)
[5]猪繁殖与呼吸综合征的免疫学研究进展[J]. 屈雪琪,赵建增,梁智选,李勇,白雪,梅林,温涛,何斌,杨举,罗胜军,邢海云,高英杰.  中国畜牧兽医. 2010(08)
[6]猪繁殖与呼吸综合征研究进展[J]. 徐娜,李宝玉,柳纪省.  中国动物传染病学报. 2009(04)
[7]细胞内模式识别受体研究进展[J]. 闫鸿斌,高闪电,贾万忠,才学鹏.  免疫学杂志. 2008(03)
[8]Toll样受体3及其信号通路[J]. 谢磊,夏靖燕,赵士芳.  国际口腔医学杂志. 2008(S1)
[9]单核苷酸多态性影响基因功能的机制[J]. 刘越,吕社民.  生命的化学. 2008(02)
[10]宿主细胞应答病毒感染的细胞信号转导研究新进展[J]. 阳凯,王琛.  生物化学与生物物理进展. 2006(12)

博士论文
[1]猪抗PRRSV相关基因的鉴定及功能分析[D]. 邢凤.山东农业大学 2011

硕士论文
[1]中国奶山羊线粒体DNA D-loop区遗传多样性与起源进化研究[D]. 皮秀霜.山东农业大学 2013
[2]猪PRRSV感染的介导子及CYP3A88的表达及调控研究[D]. 蒋成兰.山东农业大学 2012
[3]Chaeoglobosin Fex调控TLR3介导的小鼠树突状细胞的功能[D]. 孙琳.南京大学 2012



本文编号：3721918