泛素蛋白酶体系统在传染性支气管炎病毒复制周期中的功能性研究
发布时间：2022-12-22 23:51
禽传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是禽传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病。IBV属于冠状病毒科（Coronaviridae）、冠状病毒属（Coronavirus）的γ型冠状病毒,病毒颗粒外包囊膜,内含不分节段的单股正链RNA基因组。泛素蛋白酶体系统简称为UPS（Ubiquitin–Proteasome System）,能够降解错误折叠或受损的蛋白质,从而维持细胞内的蛋白质稳态,同时在细胞周期调控、信号转导、转录调控、细胞凋亡、抗原递呈等许多细胞生理活动中起着关键的作用。目前有不少报道表明病毒的感染依赖于UPS,包括MHV等冠状病毒。然而,UPS对IBV增殖的影响,尚不清楚。本研究以Vero细胞、H1299细胞、和鸡胚胎成纤维细胞DF-1为细胞模型,采用多种方法研究UPS对IBV感染和增殖的作用。一、抑制UPS系统,不利于IBV的感染和增殖IBV感染Vero、H1299、或DF-1细胞,在不同的感染时间点,分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、...
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 传染性支气管炎概述
1.2 传染性支气管炎病毒的生活史
1.2.1 吸附
1.2.2 内吞
1.2.3 胞内运输
1.2.4 脱壳
1.2.5 复制酶复合物的翻译与组装
1.2.6 复制和转录
1.2.7 翻译
1.2.8 病毒的组装和释放
1.3 泛素蛋白酶体系统(UPS)的概述
1.3.1 UPS简介
1.3.2 泛素化修饰简介
1.3.3 蛋白质泛素化修饰类型
1.3.4 UPS的功能
1.4 UPS与病毒复制之间的相互作用
1.4.1 UPS降解细胞内的蛋白质
1.4.2 UPS系统降解病毒蛋白
1.4.3 病毒蛋白的泛素化和类泛素化修饰
1.5 结语
1.6 本研究的目的及意义
第二章 UPS促进冠状病毒的复制
2.1 实验材料
2.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
2.2.3 RNA抽提和RT-PCR
2.2.4 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
2.2.5 细胞毒性的测定
2.2.6 扩增IBV
2.3 结果
2.3.1 不同的UPS抑制剂影响IBV的早期阶段
2.3.2 UPS在感染后0-4 小时促进病毒的感染
2.4 讨论
第三章 UPS在IBV内吞之后,起始翻译之前发挥作用
3.1 实验材料
3.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 IBV感染细胞实验
3.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
3.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
3.2.4 RNA抽提和RT-PCR
3.3 实验结果
3.3.1 UPS抑制剂不影响病毒的内吞
3.3.2 UPS在 IBV起始翻译之前发挥作用
3.4 讨论
第四章 相关蛋白的泛素化促进IBV入胞
4.1 实验材料
4.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 IBV感染细胞实验
4.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
4.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
4.2.4 RNA抽提和RT-PCR
4.2.5 PYR-41药物抑制实验
4.2.6 TCID_(50)测定
4.2.7 外源表达泛素质粒
4.3 实验结果
4.3.1 UPS抑制剂处理减少可利用的游离泛素蛋白单体
4.3.2 在感染后0-2 小时抑制蛋白泛素化,明显抑制病毒复制
4.3.3 外源表达泛素,不影响IBV的入胞和感染效率
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3724290
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 传染性支气管炎概述
1.2 传染性支气管炎病毒的生活史
1.2.1 吸附
1.2.2 内吞
1.2.3 胞内运输
1.2.4 脱壳
1.2.5 复制酶复合物的翻译与组装
1.2.6 复制和转录
1.2.7 翻译
1.2.8 病毒的组装和释放
1.3 泛素蛋白酶体系统(UPS)的概述
1.3.1 UPS简介
1.3.2 泛素化修饰简介
1.3.3 蛋白质泛素化修饰类型
1.3.4 UPS的功能
1.4 UPS与病毒复制之间的相互作用
1.4.1 UPS降解细胞内的蛋白质
1.4.2 UPS系统降解病毒蛋白
1.4.3 病毒蛋白的泛素化和类泛素化修饰
1.5 结语
1.6 本研究的目的及意义
第二章 UPS促进冠状病毒的复制
2.1 实验材料
2.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
2.2.3 RNA抽提和RT-PCR
2.2.4 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
2.2.5 细胞毒性的测定
2.2.6 扩增IBV
2.3 结果
2.3.1 不同的UPS抑制剂影响IBV的早期阶段
2.3.2 UPS在感染后0-4 小时促进病毒的感染
2.4 讨论
第三章 UPS在IBV内吞之后,起始翻译之前发挥作用
3.1 实验材料
3.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 IBV感染细胞实验
3.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
3.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
3.2.4 RNA抽提和RT-PCR
3.3 实验结果
3.3.1 UPS抑制剂不影响病毒的内吞
3.3.2 UPS在 IBV起始翻译之前发挥作用
3.4 讨论
第四章 相关蛋白的泛素化促进IBV入胞
4.1 实验材料
4.1.1 病毒、病毒抗体和细胞
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 IBV感染细胞实验
4.2.2 细胞上清和蛋白样品的收集
4.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析(Western blot)
4.2.4 RNA抽提和RT-PCR
4.2.5 PYR-41药物抑制实验
4.2.6 TCID_(50)测定
4.2.7 外源表达泛素质粒
4.3 实验结果
4.3.1 UPS抑制剂处理减少可利用的游离泛素蛋白单体
4.3.2 在感染后0-2 小时抑制蛋白泛素化,明显抑制病毒复制
4.3.3 外源表达泛素,不影响IBV的入胞和感染效率
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3724290
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