Ii-Key和PEP-1携带异种病毒表位嵌合疫苗的构建及其体液免疫效应
发布时间：2022-12-24 12:35
跨膜糖蛋白恒定链（invariant china, Ii）在抗原递呈细胞内主要参与主要组织相容性复合体（MHC）II类分子与抗原肽复合物的装配,其关键活性基团（Ii-Key）在此过程中发挥重要作用。近些年,Ii-Key已被证实能够携带单一抗原或抗原肽,有效增强细胞免疫和体液免疫。PEP-1是一种人工设计的细胞膜穿透肽（Cell penetrating peptide,CPP）,具有克服细胞膜的屏障作用跨膜转导能力,以非能量、非受体依赖性的方式把蛋白质、肽段、寡核苷酸等跨膜转导入各种细胞的胞浆和胞核内。本文基于Ii-Key和PEP-1载体上构建异源多表位串联肽新型疫苗,为双重防控鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease, IBD）和新城疫（Newcastle disease, ND）提供参考。首先,本文构建了Ii-Key与鸡传染性法氏囊病病毒VP2肽表位（aa197-209）和新城疫病毒HN肽表位（aa345-353）的嵌合体,并将嵌合体基因插入pET-32a原核表达载体,转化E.coli Rosetta通过IPTG诱导表达,用镍柱亲和层析纯化融合蛋白,免疫S...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 质粒和菌株
1.1.3 酶类及相关试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.1.5 主要实验仪器
1.2 实验方法
1.2.1 嵌合体的构建及基因合成
1.2.2 嵌合体原核表达重组质粒的构建
1.2.3 重组质粒的表达及条件优化
1.2.4 融合蛋白表达形式的鉴定
1.2.5 融合蛋白的大量提取与纯化
1.2.6 Folin-酚法检测融合蛋白浓度
1.2.7 动物免疫
1.2.8 间接ELISA方法测定血清效价
1.2.9 Western-Blot
1.2.10 嵌合体真核表达重组质粒的构建
1.2.11 超纯真核质粒的提取
1.2.12 293T细胞的复苏、传代及细胞转染
2 结果与分析
2.1 原核表达重组质粒的构建与鉴定结果
2.1.1 基于Ii-Key的目的片段的PCR扩增结果鉴定
2.1.2 基于PEP-1和Ii-Key的目的片段的PCR扩增结果鉴定
2.2 嵌合体蛋白的诱导表达结果
2.3 融合蛋白表达形式的鉴定结果
2.4 融合蛋白的抗原特异性和体液免疫效应
2.5 VP2/HN和Ii-Key/VP2/HN与MHC Ⅱ类分子细胞内的共定位情况
3 讨论
3.1 Ii-Key作为疫苗载体的效应
3.2 PEP-1的穿膜机制
3.3 PEP-1对Ii-Key的抑制效应
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Induction of Effective Antitumor Immune Response by Combined Administration of hIL-18 and NDV HN[J]. HUANG Hai-yan1,2,5, MENG Xiang-wei1, LI Xiao1,2,3, SUN Li-li2,4, KAN Shi-fu2,3, LIU Lei1,2, PIAO Bing-guo1,2, YANG Guo-hua1,2, WANG Zhuo-yue2,3, WANG Yu-hang2,3, QI Yan-xin2,3 and JIN Ning-yi2,3* 1. Department of Gastroenterology, the First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, P. R. China; 2. Laboratory of Genetic Engineering of PLA, 3. Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control, Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062, P. R. China; 4. Department of Head and Neck Surgery, Tumor Hospital of Jilin Province, Changchun 130012, P. R. China; 5. Digestive Internal Medicine, Xuzhou Center Hospital, Xuzhou 221009, P. R. China. Chemical Research in Chinese Universities. 2011(05)
[2]猪源新城疫病毒JL01株分离鉴定及F基因遗传进化分析[J]. 鲁会军,金扩世,李旭,王瑞琳,韩松,金宁一. 病毒学报. 2009(01)
[3]传染性法氏囊病及其病原分子生物学研究进展[J]. 何秀苗,阳秀英,韦平. 动物医学进展. 2007(02)
[4]PEP-1-CAT融合蛋白预处理对过氧化氢诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 姚玲玲,王家宁,黄永章,郭凌郧,孔霞. 中华心血管病杂志. 2006(10)
[5]PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其转导入人脐静脉内皮细胞[J]. 董晓,王家宁,黄永章,郭凌郧. 南方医科大学学报. 2006(08)
[6]鸡MHC与传染性疾病遗传抗性的相关性研究进展[J]. 李国勤,卢立志,王得前,沈军达,陶争荣,赵爱珍,原爱平. 遗传. 2006(07)
[7]基于Ii分子的HCV-NS3内源性靶向基因疫苗的构建及免疫应答研究[J]. 高明,王海平,卢媛,周勇,王燕宁,詹林盛,王全立. 中华微生物学和免疫学杂志. 2007 (03)
本文编号：3726151
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 质粒和菌株
1.1.3 酶类及相关试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.1.5 主要实验仪器
1.2 实验方法
1.2.1 嵌合体的构建及基因合成
1.2.2 嵌合体原核表达重组质粒的构建
1.2.3 重组质粒的表达及条件优化
1.2.4 融合蛋白表达形式的鉴定
1.2.5 融合蛋白的大量提取与纯化
1.2.6 Folin-酚法检测融合蛋白浓度
1.2.7 动物免疫
1.2.8 间接ELISA方法测定血清效价
1.2.9 Western-Blot
1.2.10 嵌合体真核表达重组质粒的构建
1.2.11 超纯真核质粒的提取
1.2.12 293T细胞的复苏、传代及细胞转染
2 结果与分析
2.1 原核表达重组质粒的构建与鉴定结果
2.1.1 基于Ii-Key的目的片段的PCR扩增结果鉴定
2.1.2 基于PEP-1和Ii-Key的目的片段的PCR扩增结果鉴定
2.2 嵌合体蛋白的诱导表达结果
2.3 融合蛋白表达形式的鉴定结果
2.4 融合蛋白的抗原特异性和体液免疫效应
2.5 VP2/HN和Ii-Key/VP2/HN与MHC Ⅱ类分子细胞内的共定位情况
3 讨论
3.1 Ii-Key作为疫苗载体的效应
3.2 PEP-1的穿膜机制
3.3 PEP-1对Ii-Key的抑制效应
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Induction of Effective Antitumor Immune Response by Combined Administration of hIL-18 and NDV HN[J]. HUANG Hai-yan1,2,5, MENG Xiang-wei1, LI Xiao1,2,3, SUN Li-li2,4, KAN Shi-fu2,3, LIU Lei1,2, PIAO Bing-guo1,2, YANG Guo-hua1,2, WANG Zhuo-yue2,3, WANG Yu-hang2,3, QI Yan-xin2,3 and JIN Ning-yi2,3* 1. Department of Gastroenterology, the First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, P. R. China; 2. Laboratory of Genetic Engineering of PLA, 3. Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control, Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062, P. R. China; 4. Department of Head and Neck Surgery, Tumor Hospital of Jilin Province, Changchun 130012, P. R. China; 5. Digestive Internal Medicine, Xuzhou Center Hospital, Xuzhou 221009, P. R. China. Chemical Research in Chinese Universities. 2011(05)
[2]猪源新城疫病毒JL01株分离鉴定及F基因遗传进化分析[J]. 鲁会军,金扩世,李旭,王瑞琳,韩松,金宁一. 病毒学报. 2009(01)
[3]传染性法氏囊病及其病原分子生物学研究进展[J]. 何秀苗,阳秀英,韦平. 动物医学进展. 2007(02)
[4]PEP-1-CAT融合蛋白预处理对过氧化氢诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 姚玲玲,王家宁,黄永章,郭凌郧,孔霞. 中华心血管病杂志. 2006(10)
[5]PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其转导入人脐静脉内皮细胞[J]. 董晓,王家宁,黄永章,郭凌郧. 南方医科大学学报. 2006(08)
[6]鸡MHC与传染性疾病遗传抗性的相关性研究进展[J]. 李国勤,卢立志,王得前,沈军达,陶争荣,赵爱珍,原爱平. 遗传. 2006(07)
[7]基于Ii分子的HCV-NS3内源性靶向基因疫苗的构建及免疫应答研究[J]. 高明,王海平,卢媛,周勇,王燕宁,詹林盛,王全立. 中华微生物学和免疫学杂志. 2007 (03)
本文编号：3726151
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