41株四川兔源金黄色葡萄球菌毒力检测

发布时间：2023-01-09 13:44

　　金黄色葡萄球菌是世界性存在的能够感染人与动物的病原菌。在人类能通过感染引起坏死性肺炎、化脓性关节炎以及败血症等,在养殖业上还能感染鸡、牛和家兔等。为探讨四川部分区域家兔源金黄色葡萄球菌毒力基因携带率、基因型差异及亲缘关系的情况。本试验在对四川部分区域41株家兔源金黄色葡萄球菌特异性鉴定femB基因和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA和MSSA筛选的基础上,通过PCR法检测13种常见的毒力基因,并应用MLST和PFGE两种分子分型方法研究四川部分区域金黄色葡萄球菌基因型差异与亲缘关系。结果显示,41株兔源金黄色葡萄球菌在LB固体培养基37℃恒温培养24 h后,均可形成表面光滑、厚、圆形隆起、湿润、边缘整齐的菌落。革兰氏染色镜检为球形,成双或成葡萄串状排列的G⁺球菌。41株兔源金黄色葡萄球菌femB基因PCR鉴定结果显示均可扩增出约651 bp的特异性条带,结合形态学与PCR检测结果41株菌株均为金黄色葡萄球菌。同时,mecA基因扩增结果显示,41株金黄色葡萄球菌中共31株耐药基因mecA阳性,确认为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,检出率为75.61%。合成13个... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1. 金葡菌基础研究
        1.1 金葡菌的生物学特性
        1.2 MRSA与MSSA筛选的研究价值
    2.金葡菌毒力因子系统研究
        2.1 肠毒素
        2.2 溶血毒素
        2.3 杀白细胞素
        2.4 表皮剥脱素
        2.5 中毒休克综合征毒素
    3. 金葡菌基因分型研究方法
        3.1 多位点序列分型
        3.2 脉冲场凝胶电泳
    4 目的及意义
第二章 金黄色葡萄球菌的复苏、特异性鉴定及MRSA筛选
    1. 材料(Materials)
        1.1 细菌来源
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器设备
    2. 方法(Method)
        2.1 病原菌的复苏纯化
            2.1.1 金黄色葡萄球菌的培养及形态特征观察
            2.1.2 革兰氏染色
            2.1.3 金黄色葡萄球菌的DNA提取
            2.1.4 金黄色葡萄球菌的femB基因鉴定与MRSA筛选
    3. 结果(Result)
        3.1 分离株的表型特征
            3.1.1 细菌形态特征
        3.2 fem B基因特异性鉴定、MRSA及MSSA的筛选
    4. 讨论(Discuss)
    5. 小结
第三章 金黄色葡萄球菌的毒力基因检测
    1. 材料(Materials)
        1.1 菌株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器设备
    2. 方法(Method)
        2.1 金葡菌DNA片段提取
        2.2 金葡菌毒力基因PCR反应
            2.2.1 选取毒力因子的引物合成
            2.2.2 毒力基因PCR扩增程序及条件
    3. 结果(Result)
        3.1 毒力基因检测结果
        3.2 MRSA与MSSA毒力基因分布情况比较
    4. 讨论(Discuss)
    5. 小结
第四章 家兔源金黄色葡萄球菌的分子分型
    1. 材料(Materials)
        1.1 菌株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器设备
    2. 方法(Method)
        2.1 金黄色葡萄球菌多位点序列分型
            2.1.1 金黄色葡萄球菌基因组DNA提取
            2.1.2 管家基因的选取与引物合成
            2.1.3 金葡菌管家基因位点PCR反应条件
            2.1.4 PCR产物处理
            2.1.5 金葡菌管家基因序列分析
        2.2 金葡菌PFGE
            2.2.1 制作胶块
            2.2.2 细胞裂解
            2.2.3 洗胶块
            2.2.4 DNA酶切
            2.2.5 点样
            2.2.6 电泳
            2.2.7 拍照制图
            2.2.8 PFGE聚类分析
    3. 结果(Result)
        3.1 MLST结果
            3.1.1 鉴定金葡菌ST序列型
            3.1.2 金葡菌CC克隆群的建立
        3.2 PFGE结果
            3.2.1 金葡菌PFGE分型的相似性分析
    4. 讨论(Discuss)
    5. 小结
结论(Conclusion)
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌肠毒素基因与MLST及spa分子克隆相关性研究[J]. 张林吉,张小荣,曹永忠,巢国祥,任士飞,吴艳涛.  中国病原生物学杂志. 2018(05)
[2]温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究[J]. 谢爱蓉,上官智慧,胡玉琴,洪程基,李毅.  中国食品卫生杂志. 2018(03)
[3]惠州市熟肉制品中金黄色葡萄球菌污染状况及PFGE分型[J]. 刘思超,罗泽燕,徐励琴,杨剑英,冯伟明,苗思慧.  中国热带医学. 2018(05)
[4]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST联合SCCmec基因分型与耐药性分析[J]. 纪冰,王凯凯,赵红梅,董艳,孟玮,邢敏,孙吉花.  中国现代医学杂志. 2018(10)
[5]牛源、兔源及人源无乳链球菌分子分型特征分析[J]. 耿毅,张雨薇,汪开毓,左之才,向正刚,李亚军,李姝蕊,王世震.  中国预防兽医学报. 2017(11)
[6]云南省食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型分析[J]. 国译丹,杨祖顺,古文鹏,汤晓召,邹颜秋硕,刘海霞,范璐.  食品安全质量检测学报. 2017(10)
[7]食物中毒金葡菌分离株产肠毒素、耐药性和PFGE分型[J]. 夏丹,吴新伟,张欣强,刘艳慧,陆家海,王鸣.  热带医学杂志. 2017(07)
[8]四川兔源金黄色葡萄球菌毒力检测及分子分型[J]. 向正刚,耿毅,张雨薇,杨泽晓,欧阳萍,李亚军,牟维豪,王世震.  华南农业大学学报. 2017(04)
[9]台州市食源性金黄色葡萄球菌基因分型研究[J]. 沈伟伟,裘丹红,王宇,盛莹,陈喜凯.  中国卫生检验杂志. 2017(02)
[10]我国耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子流行病学研究进展[J]. 薛丽丽.  临床合理用药杂志. 2017(01)

博士论文
[1]奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌毒力因子的克隆表达及生物活性研究[D]. 杨宏军.山东农业大学 2007

硕士论文
[1]甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌临床分离株的分子分型及耐药性分析[D]. 杨延成.第三军医大学 2016
[2]宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因检测及耐药性研究[D]. 杨慧君.宁夏大学 2016
[3]金黄色葡萄球菌分子特征及耐药相关分子标志[D]. 刘静.郑州大学 2015
[4]不同来源金黄色葡萄球菌毒力基因分布及分子分型研究[D]. 贺朋朋.扬州大学 2014
[5]动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的多重PCR检测[D]. 刘冬香.四川农业大学 2009
[6]奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌相关毒力因子的研究[D]. 王英杰.山东师范大学 2008



本文编号：3729288