板蓝根多糖调节伪狂犬病毒对树突状细胞成熟及功能影响的作用研究

发布时间：2023-01-12 16:00

　　本研究建立了猪外周血单核细胞来源树突状细胞体外培养模型,并从免疫发病猪猪场发病猪体内分离到一株PRV野毒株,观察了IRPS和PRV CH-HN野毒株在影响DC成熟和功能中的作用,同时研究了IRPS在PRV影响DC成熟和功能中的调节作用,初步探讨PRV的致病机制,探索IRPS作为免疫增强剂和抗病毒药物在调节DC成熟以及调节PRV对DC成熟和功能影响中的作用机制。本研究共分五部分,试验一：猪外周血单核细胞来源树突状细胞体外培养模型的建立。采用淋巴细胞分离液梯度离心获得猪外周血单核细胞,贴壁法分离目的细胞,利用IL-4、GM-CSF双因子法诱导分化未成熟DC,加入LPS 48h刺激成熟。形态学观察发现imDCs表面粗糙,有大量褶皱,毛刺样突起较少,且较短小；而mDCs具有明显的形态学特征,体积增大、表面大量树枝样突起。流式细胞仪检测结果表明不同培养阶段猪MoDCs均表达CD172a、CD1、CD80、CD86和SLA-II-DR（猪MHCⅡ）,且mDCs的CD172a、CD1、CD80、CD86和SLA-Ⅱ-DR表达率分别为55.2%、53.6%、43.6%、65.4%和61.1%,均较im... 

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

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致谢
符号及缩略语
摘要
第一部分 文献综述
    1 猪树突状细胞的研究进展
        1.1 猪树突状细胞来源
            1.1.1 单核细胞来源DCs(MoDC)
            1.1.2 骨髓造血干细胞来源DCs(BMDC)
            1.1.3 血液中DCs
            1.1.4 粘膜DCs
        1.2 DCs模式识别受体对其配体的识别
            1.2.1 cDCs对TLR配体的反应
            1.2.2 pDCs对TLR配体的反应
        1.3 猪DCs的抗病毒反应
        1.4 猪DCs和淋巴细胞激活
            1.4.1 DCs和T淋巴细胞的相互作用
            1.4.2 DCs和B淋巴细胞的相互作用
        1.5 猪MoDCs模型的优势
    2 板蓝根多糖研究进展
        2.1 免疫调节作用
        2.2 抗菌抗病毒作用
            2.2.1 抗菌作用
            2.2.2 抗病毒作用
        2.3 抗炎抗毒素作用
        2.4 抗肿瘤作用
    3 猪伪狂犬病研究进展
        3.1 PRV病原学特点
        3.2 疫苗研究进展及防治
    4 研究目的及意义
第一章 猪外周血单核细胞来源树突状细胞的体外培养及鉴定
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要仪器设备
            1.1.3 实验动物
        1.2 主要试剂配制
        1.3 试验方法
            1.3.1 猪外周MoDC体外诱导培养
            1.3.2 LPS刺激MoDC成熟
            1.3.3 MoDC形态学观察
            1.3.4 流式细胞仪检测细胞表型
            1.3.5 细胞吞噬功能试验
            1.3.6 同种异体混合淋巴细胞反应
            1.3.7 统计方法
    2 结果
        2.1 倒置显微镜观察猪外周MoDC细胞形态
        2.2 扫描电镜观察猪外周MoDC细胞形态
        2.3 流式细胞仪检测猪外周MoDC表面分子的表达
        2.4 猪外周血MoDC吞噬功能
        2.5 同种异体混合淋巴细胞反应
    3 讨论
第二章 IRPS对猪外周血MoDC成熟和功能的作用研究
    1 材料与方法
        1.1 材料和仪器
        1.2 试剂配制
        1.3 试验方法
            1.3.1 猪外周血MoDC体外诱导培养
            1.3.2 试验分组及药物处理
            1.3.3 MoDC形态学观察
            1.3.4 表型检测
            1.3.5 细胞吞噬功能试验
            1.3.6 同种异体混合淋巴细胞反应
            1.3.7 统计方法
    2 结果
        2.1 IRPS诱导猪外周血MoDC形态成熟
            2.1.1 倒置显微镜观察
            2.1.2 扫描电镜观察
        2.2 IRPS促进猪外周血 MoDC表型成熟
        2.3 IRPS增强猪外周血 MoDC刺激同种异体T细胞增殖能力
        2.4 IRPS抑制猪外周血MoDC吞噬功能
    3 讨论
第三章 高致病性伪狂犬病毒分离鉴定及致病性研究
    1 材料与方法
        1.1 试剂
        1.2 实验动物
        1.3 培养基、血清及细胞
        1.4 样品采集及处理
        1.5 病毒的分离与鉴定
        1.6 病毒TCID50检测
        1.7 引物设计及基因扩增
        1.8 动物试验
        1.9 病理学观察
    2 结果
        2.1 病毒分离
        2.2 病毒TCID50检测
        2.3 序列分析
        2.4 动物感染试验
            2.4.1 临床症状
            2.4.2 剖检病变
            2.4.3 病理组织学观察
    3 讨论
第四章 PRV感染对猪外周血 MoDC成熟和功能的影响
    1 材料与方法
        1.1 毒株和细胞
        1.2 试剂和仪器
        1.3 试剂配制
            1.3.1 标准品的配制
            1.3.2 其他试剂配制
        1.4 试验方法
            1.4.1 猪外周血MoDC体外诱导培养
            1.4.2 病毒培养及感染MoDC
            1.4.3 流式细胞仪检测细胞表型
            1.4.4 同种异体混合淋巴细胞反应
            1.4.5 抗体芯片检测细胞因子
            1.4.6 数据分析
    2 结果
        2.1 PRV抑制猪外周血MoDC表型成熟
        2.2 PRV抑制猪外周血MoDC刺激同种异体T细胞增殖能力
        2.3 PRV对猪外周血MoDC分泌细胞因子的影响
    3 讨论
        3.1 PRV感染对MoDC表型和功能的影响
        3.2 PRV感染对MoDC分泌细胞因子的影响
第五章 IRPS对PRV抑制对猪外周血MoDC成熟和功能的影响
    1 材料与方法
        1.1 毒株和细胞
        1.2 试剂和仪器
        1.3 试剂配制
        1.4 试验方法
            1.4.1 MoDC分离培养
            1.4.2 LPS、IRPS体外刺激Mo DC成熟
            1.4.3 PRV病毒感染Mo DC
            1.4.4 同种异体混合淋巴细胞反应
            1.4.5 细胞凋亡检测
            1.4.6 抗体芯片检测细胞因子
        1.5 数据分析
    2 结果
        2.1 IRPS对PRV抑制猪MoDC表型的调节
        2.2 IRPS对PRV抑制猪MoDC刺激T细胞增殖能力的调节
        2.3 IRPS对PRV影响猪MoDC分泌细胞因子的调节
        2.4 IRPS对PRV诱导DC细胞凋亡的调节
    3 讨论
全文结论
参考文献
ABSTRACT


【参考文献】：
期刊论文
[1]板蓝根与抗内毒素药效作用及化学基础研究[J]. 常晓波.  吉林医学. 2013(27)
[2]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志.  中国动物传染病学报. 2013(03)
[3]猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J]. 彭金美,安同庆,赵鸿远,刘益民,陈家锃,冷超粮,孙艳,常丹,田志军,童光志.  中国预防兽医学报. 2013(01)
[4]不同粉碎度板蓝根抗细菌内毒素作用[J]. 秦传勇,刘云海.  医药导报. 2012(11)
[5]板蓝根双糖fructopyrano-（1→4）-glucopyranose对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响[J]. 刘明华,李茂,孙琴,肖顺汉.  中国药学杂志. 2012(19)
[6]红桂木凝集素对树突状细胞生长的影响[J]. 王婧娉,李璐,曾麒燕.  广西医学. 2012(06)
[7]板蓝根粗多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用[J]. 耿婵娟,刘志明,迟晓星,唐彦君.  农产品加工(学刊). 2012(04)
[8]板蓝根多糖对PRRSV疫苗的免疫增强试验[J]. 麻延峰,王宏艳,傅春泉,周文仙.  家畜生态学报. 2011(06)
[9]板蓝根多糖对内毒素诱导人单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响[J]. 胡佳亮,冯怡,王硕,王源,徐德生,阮克锋.  上海中医药杂志. 2011(07)
[10]板蓝根多糖对体外培养鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响[J]. 刘俊玲,张元元,崔保安,张红英,王学兵.  中国农学通报. 2011(11)

博士论文
[1]3种植物多糖抗猪蓝耳病病毒及免疫增强作用研究[D]. 张红英.河南农业大学 2007
[2]人巨细胞病毒感染树突状细胞后对其功能影响及机制研究[D]. 赵广圣.浙江大学 2006

硕士论文
[1]板蓝根多糖对体外小鼠骨髓衍生的树突状细胞亚群形态及功能的影响[D]. 张元元.河南农业大学 2013
[2]PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响[D]. 李志娟.河南农业大学 2011
[3]板蓝根多糖的化学分离及其免疫增强活性的研究[D]. 张弩.华中科技大学 2008
[4]板蓝根多糖化学与溶液粘度及免疫调节活性的研究[D]. 许桂红.扬州大学 2006
[5]板蓝根抗流感病毒的生化机理研究[D]. 吴灵威.福州大学 2005
[6]树突状细胞在登革病毒感染中的作用研究[D]. 史毓杰.暨南大学 2005
[7]板蓝根抗病毒有效部位化学成分的研究[D]. 王福男.沈阳药科大学 2005



本文编号：3730109