甲基转移酶METTL21C调控鸡骨骼肌生长发育机制研究

发布时间：2023-01-29 17:36

　　甲基转移酶样21（Methyltransferase like 21,METTL21）是甲基转移酶超家族的一类远亲成员,包括METTL21A、METTL21B、METTL21C和METTL21D四个成员。其中METTL21C在动物机体各个组织中均表达,尤其是骨骼肌组织中特异性高表达。研究发现,METTL21C能够促进小鼠C2C12细胞的成肌分化,抑制肌肉萎缩,但其在家禽骨骼肌中的功能研究相对较少。因此,本论文旨在探究METTL21C影响禽类骨骼肌生长发育机制,为改善家禽肌肉品质、提高生产性能提供参考价值,也为运动科学、肌肉疾病及代谢稳态等医学问题奠定理论基础。本研究以略阳乌鸡为研究对象,采用酶消化法分离鸡原代骨骼肌卫星细胞,并以此为细胞模型,探究METTL21C对成肌分化的影响;通过液相色谱质谱检测和免疫共沉淀技术鉴定METTL21C的互作蛋白,验证METTL21C与Hsc70结合在成肌分化过程中的作用,最终系统阐述METTL21C影响家禽骨骼肌生长发育的分子机理。本研究主要获得实验结果如下:1.分析略阳乌鸡腿肌组织转录组测序数据,结合文献查阅,发现甲基转移酶METTL21C基因可能影... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词
第1章 绪论
    1.1 家禽骨骼肌的生物学特性
        1.1.1 骨骼肌的组织结构特点
        1.1.2 骨骼肌的生长发育过程
    1.2 蛋白质翻译后修饰
    1.3 蛋白甲基化修饰调控肌肉发育
        1.3.1 蛋白质甲基化修饰
        1.3.2 蛋白质精氨酸甲基化修饰调控肌肉发育
        1.3.3 蛋白质赖氨酸甲基化修饰影响肌肉发育
    1.4 甲基转移酶METTL21C与骨骼肌发育
    1.5 分子伴侣HSC70维持骨骼肌稳态
    1.6 本研究目的意义
第2章 转录组测序筛选鸡骨骼肌发育关键基因
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 略阳乌鸡腿肌组织转录组测序
        2.2.2 RNA-seq数据质控及数据库比对
        2.2.3 差异基因表达分析
        2.2.4 METTL21C基因表达规律检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 RNA-seq质量评估
        2.3.2 差异基因表达分析
        2.3.3 METTL21C表达规律检测
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 鸡原代骨骼肌卫星细胞的分离及鉴定
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 鸡原代骨骼肌卫星细胞的分离与培养
        3.2.2 鸡原代骨骼肌卫星细胞的鉴定
        3.2.3 骨骼肌卫星细胞的成肌诱导分化
    3.3 实验结果
        3.3.1 骨骼肌卫星细胞分离培养
        3.3.2 骨骼肌卫星细胞的RT-PCR鉴定
        3.3.3 标志基因Pax7 表达水平检测
        3.3.4 骨骼肌卫星细胞诱导分化及鉴定
    3.4 讨论
        3.4.1 原代骨骼肌卫星细胞的分离
        3.4.2 骨骼肌卫星细胞的鉴定
    3.5 小结
第4章 METTL21C基因功能验证
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物、质粒及菌株
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 METTL21C基因超表达载体构建
        4.2.2 METTL21C超表达载体转染鸡骨骼肌卫星细胞
        4.2.3 Pax7、MyoD等肌肉发育基因表达检测
    4.3 实验结果
        4.3.1 METTL21C超表达载体的构建
        4.3.2 原代骨骼肌卫星细胞转染
        4.3.3 超表达METTL21C对肌肉发育基因的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 METTL21C与 Hsc70互作探究
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验细胞、质粒
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 LC-MS/MS筛选METTL21C互作蛋白
        5.2.2 Hsc70含HA标签超表达载体构建
        5.2.3 Hsc70与METTL21C的互作验证
        5.2.4 Hsc70基因功能验证
        5.2.5 METTL21C与Hsc70的互作位点鉴定
    5.3 实验结果
        5.3.1 METTL21C互作蛋白的筛选
        5.3.2 Hsc70基因超表达载体构建
        5.3.3 Hsc70与METTL21C的互作关系验证
        5.3.4 Hsc70和METTL21C互作对成肌分化的影响
        5.3.5 Hsc70与METTL21C互作位点鉴定
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
参考文献
附录
    附录1 主要实验试剂
    附录2 主要实验仪器
攻读硕士期间取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]略阳乌鸡METTL21C基因克隆及超表达载体构建[J]. 路宏朝,李蕊清,孙志阳,王令,张涛.  西北农业学报. 2019(03)
[2]乌鸡肌卫星细胞的分离培养与鉴定[J]. 李蕊清,赵家荣,孙志阳,孙英英,路宏朝.  中国家禽. 2018(04)
[3]浙东白鹅骨骼肌发育相关因子MRFs,Pax3和Pax7基因的表达规律[J]. 王吟方亭,任婷,朱松会,梁世日,何珂,赵阿勇.  浙江农林大学学报. 2017(06)
[4]安淮山羊骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定[J]. 郑琪,睢梦华,朱龙,吴昊,丁建平,张运海,凌英会.  安徽农业大学学报. 2017(02)
[5]蛋白质翻译后修饰简介[J]. 陈霞,罗良煌.  生物学教学. 2017(02)
[6]非组蛋白甲基化研究进展[J]. 聂茜,陈荣,舒亚南,陈鹏,吴珺,韩梅.  生命的化学. 2015(01)
[7]家禽骨骼肌的生长发育规律及调控[J]. 王月超,蔡辉益,闫海洁,陈晓琳,张姝,张爱华,杨斌,郭军蕊.  饲料工业. 2014(17)
[8]牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化[J]. 王轶敏,代阳,刘新峰,刘中伟,李吉霞,郭宏,丁向彬.  中国畜牧兽医. 2014(07)
[9]蛋白质翻译后修饰研究进展[J]. 阮班军,代鹏,王伟,孙建斌,张文涛,颜真,杨静华.  中国细胞生物学学报. 2014(07)
[10]小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定[J]. 代阳,王轶敏,刘新峰,樊晗璐,李吉霞,郭宏,丁向彬.  天津农学院学报. 2014(01)



本文编号：3732724