miR-214-3p对3T3-L1前体脂肪细胞分化的作用及机制研究
发布时间：2023-02-05 20:13
前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的过程异常复杂,该过程对哺乳动物脂肪组织生成和代谢是十分必要的。这一复杂过程受到很多调节因子的调控。microRNAs(miRNAs)是长度大约为22个核苷酸的非编码小RNA,通过靶基因的介导参与许多生命过程的调控,包括脂肪细胞分化过程。用成脂抑制剂LiCl处理3T3-L1前体脂肪细胞后诱导分化,发现miR-214-3p显著下调,并且miR-214-3p在小鼠、猪和人等多个物种间序列高度保守。因此,本研究以3T3-L1细胞系作为研究材料,旨在探究miR-214-3p在3T3-L1前体脂肪细胞分化中的作用与机制。本实验通过对3T3-L1细胞转染miR-214-3p模拟物(agomir)或拮抗剂(antagomir),研究了miR-214-3p对3T3-L1前体脂肪细胞增殖和分化的作用;运用生物信息学软件分析和双荧光素酶报告实验,预测并且验证了miR-214-3p在3T3-L1细胞分化中的潜在靶基因。获得的主要研究结果如下:1.miR-214-3p促进3T3-L1前体脂肪细胞的增殖在3T3-L1细胞中过表达miR-214-3p后,可以明显上调细胞增殖相关基因C...
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 miRNA的产生及作用机制
1.1.1 miRNA的产生
1.1.2 miRNA的作用机制
1.2 脂肪组织的生物学功能及成脂调控
1.2.1 脂肪组织的生物学功能
1.2.2 脂肪细胞的成脂调控
1.3 miRNA在脂肪生成中的研究进展
1.3.1 参与成脂激活的miRNAs
1.3.2 参与成脂抑制的miRNAs
1.3.3 参与棕色和米色脂肪细胞调节的miRNAs
1.4 miR-214-3p的研究进展
1.4.1 miR-214-3p的简介
1.4.2 miR-214-3p的生物学功能
第二章 miR-214-3p表达与脂质生成的相关性研究
2.1 材料和方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 总RNA提取及反转录
2.1.3 荧光定量PCR
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果与分析
2.2.1 miR-214-3p的小鼠组织表达谱和 3T3-L1增殖、分化过程的表达时序
2.2.2 肥胖小鼠模型构建及miR-214-3p的差异表达分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 miR-214-3p对 3T3-L1前体脂肪细胞增殖的作用研究
3.1 材料和方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 培养基的配制
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 细胞的培养及转染
3.1.5 总RNA的提取及反转录
3.1.6 总蛋白的提取及蛋白免疫印迹
3.1.7 实时荧光定量PCR
3.1.8 CCK-8 实验
3.1.9 Ed U实验
3.1.10 数据统计与分析
3.2 结果与分析
3.2.1 miR-214-3p促进 3T3-L1前体脂肪细胞的增殖
3.2.2 miR-214-3p促进细胞增殖相关基因的表达
3.2.3 干扰miR-214-3p抑制 3T3-L1前体脂肪细胞的增殖
3.2.4 干扰miR-214-3p下调3T3-L1细胞增殖相关基因的表达
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 miR-214-3p对 3T3-L1细胞分化的作用研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 细胞的培养和转染处理
4.1.3 细胞总RNA的提取及反转录
4.1.4 荧光定量PCR
4.1.5 细胞总蛋白的提取及免疫印迹实验
4.1.6 Bodipy染色实验
4.1.7 油红O染色实验
4.1.8 数据分析
4.2 结果与分析
4.2.1 3T3-L1细胞诱导成脂分化过程中细胞形态的变化
4.2.2 miR-214-3p促进 3T3-L1细胞的脂质沉积
4.2.3 miR-214-3p促进成脂标志基因的表达
4.2.4 干扰miR-214-3p减少 3T3-L1细胞的脂质沉积
4.2.5 干扰miR-214-3p抑制成脂基因的表达
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 miR-214-3p调控 3T3-L1细胞成脂分化的靶基因预测及验证
5.1 材料和方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 miRNA靶基因预测
5.1.3 靶基因Ctnnb1的定量引物设计
5.1.4 双荧光素酶载体的构建
5.1.5 细胞培养及转染
5.1.6 细胞总RNA的提取及反转录
5.1.7 荧光定量PCR
5.1.8 细胞总蛋白的提取及免疫印迹实验
5.1.9 数据的统计与分析
5.2 结果与分析
5.2.1 靶基因的预测
5.2.2 miR-214-3p靶基因的通路富集分析
5.2.3 Ctnnb1在 3T3-L1细胞分化过程中的表达时序
5.2.4 miR-214-3p抑制Ctnnb1的表达
5.2.5 双荧光素酶报告系统分析验证miR-214-3p直接靶定Ctnnb1
5.3 讨论
5.4 小结
结论、创新点及进一步研究内容
结论
创新点
进一步研究内容
参考文献
附录
致谢
个人简历
本文编号：3735594
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 miRNA的产生及作用机制
1.1.1 miRNA的产生
1.1.2 miRNA的作用机制
1.2 脂肪组织的生物学功能及成脂调控
1.2.1 脂肪组织的生物学功能
1.2.2 脂肪细胞的成脂调控
1.3 miRNA在脂肪生成中的研究进展
1.3.1 参与成脂激活的miRNAs
1.3.2 参与成脂抑制的miRNAs
1.3.3 参与棕色和米色脂肪细胞调节的miRNAs
1.4 miR-214-3p的研究进展
1.4.1 miR-214-3p的简介
1.4.2 miR-214-3p的生物学功能
第二章 miR-214-3p表达与脂质生成的相关性研究
2.1 材料和方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 总RNA提取及反转录
2.1.3 荧光定量PCR
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果与分析
2.2.1 miR-214-3p的小鼠组织表达谱和 3T3-L1增殖、分化过程的表达时序
2.2.2 肥胖小鼠模型构建及miR-214-3p的差异表达分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 miR-214-3p对 3T3-L1前体脂肪细胞增殖的作用研究
3.1 材料和方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 培养基的配制
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 细胞的培养及转染
3.1.5 总RNA的提取及反转录
3.1.6 总蛋白的提取及蛋白免疫印迹
3.1.7 实时荧光定量PCR
3.1.8 CCK-8 实验
3.1.9 Ed U实验
3.1.10 数据统计与分析
3.2 结果与分析
3.2.1 miR-214-3p促进 3T3-L1前体脂肪细胞的增殖
3.2.2 miR-214-3p促进细胞增殖相关基因的表达
3.2.3 干扰miR-214-3p抑制 3T3-L1前体脂肪细胞的增殖
3.2.4 干扰miR-214-3p下调3T3-L1细胞增殖相关基因的表达
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 miR-214-3p对 3T3-L1细胞分化的作用研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 细胞的培养和转染处理
4.1.3 细胞总RNA的提取及反转录
4.1.4 荧光定量PCR
4.1.5 细胞总蛋白的提取及免疫印迹实验
4.1.6 Bodipy染色实验
4.1.7 油红O染色实验
4.1.8 数据分析
4.2 结果与分析
4.2.1 3T3-L1细胞诱导成脂分化过程中细胞形态的变化
4.2.2 miR-214-3p促进 3T3-L1细胞的脂质沉积
4.2.3 miR-214-3p促进成脂标志基因的表达
4.2.4 干扰miR-214-3p减少 3T3-L1细胞的脂质沉积
4.2.5 干扰miR-214-3p抑制成脂基因的表达
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 miR-214-3p调控 3T3-L1细胞成脂分化的靶基因预测及验证
5.1 材料和方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 miRNA靶基因预测
5.1.3 靶基因Ctnnb1的定量引物设计
5.1.4 双荧光素酶载体的构建
5.1.5 细胞培养及转染
5.1.6 细胞总RNA的提取及反转录
5.1.7 荧光定量PCR
5.1.8 细胞总蛋白的提取及免疫印迹实验
5.1.9 数据的统计与分析
5.2 结果与分析
5.2.1 靶基因的预测
5.2.2 miR-214-3p靶基因的通路富集分析
5.2.3 Ctnnb1在 3T3-L1细胞分化过程中的表达时序
5.2.4 miR-214-3p抑制Ctnnb1的表达
5.2.5 双荧光素酶报告系统分析验证miR-214-3p直接靶定Ctnnb1
5.3 讨论
5.4 小结
结论、创新点及进一步研究内容
结论
创新点
进一步研究内容
参考文献
附录
致谢
个人简历
本文编号：3735594
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