禽腺病毒血清4型入侵LMH细胞途径的研究

发布时间：2023-02-07 13:44

　　禽肝炎-心包积液综合征(Hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS)是由禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的一类急性高致病性传染病。自2015年我国爆发以来,迅速传播蔓延至全国。目前,关于FAdV-4的研究还主要集中在病毒基因组分析、病原检测等方面,有关FAdV-4在宿主细胞上的增殖特性及入侵途径还尚不明确。本研究选取鸡肝癌细胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)作为研究对象,进行了FAdV-4在LMH细胞上增殖规律及入侵途径的研究,从而对FAdV-4入侵宿主细胞的机制研究提供了理论基础。结果如下:(1)不同感染复数的FAdV-4接种LMH细胞后的增殖规律有较大差异。用FAdV-4感染LMH细胞后,通过Real-time PCR及Western blot检测FAdV-4病毒拷贝数及Hexon蛋白表达量。研究发现,以MOI=1接种LMH细胞后,FAdV-4病毒拷贝数及Hexon蛋白表达量在感染后72 h到达最高。以MOI=10接种LMH细胞后,Hexon蛋...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
文献综述
    第一章 禽腺病毒血清4型及细胞入侵途径的研究进展
        1.1 禽腺病毒血清4型研究进展
            1.1.1 病原学
            1.1.2 流行病学
            1.1.3 临床症状与病理变化
            1.1.4 诊断方法
            1.1.5 防治措施
        1.2 病毒入侵细胞途径的研究进展
            1.2.1 膜融合作用入侵细胞
            1.2.2 内吞作用入侵细胞
            1.2.3 巨胞饮作用
            1.2.4 其他入侵细胞途径
        1.3 本研究的目的与意义
试验研究
    第二章 FAdV-4在LMH细胞上增殖规律及入侵动力学研究
        2.1 材料
            2.1.1 细胞与病毒
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 FAdV-4 扩增及病毒滴度测定
            2.2.3 FAdV-4 入侵动力学实验
            2.2.4 实时荧光定量PCR检测
            2.2.5 激光共聚焦显微镜观察
            2.2.6 蛋白免疫印迹检测(Western blot)
        2.3 结果
            2.3.1 FAdV-4 感染LMH细胞后CPE观察
            2.3.2 FAdV-4 感染LMH细胞的TCID50 测定
            2.3.3 FAdV-4在LMH细胞上的增殖规律研究
            2.3.4 FAdV-4 感染LMH细胞的入侵动力学研究
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 FAdV-4 入侵LMH细胞途径的研究
        3.1 材料
            3.1.1 细胞与病毒
            3.1.2 主要试剂
            3.1.3 主要仪器
        3.2 方法
            3.2.1 细胞培养
            3.2.2 CCK法筛选化学抑制剂最适浓度
            3.2.3 透射电镜观察
            3.2.4 实时荧光定量PCR检测
            3.2.5 激光共聚焦显微镜观察
            3.2.6 蛋白免疫印迹检测(Western blot)
            3.2.7 数据统计学分析
        3.3 结果
            3.3.1 化学抑制剂最适浓度筛选
            3.3.2 透射电镜发现FAdV-4 入侵LMH细胞与内吞及巨胞饮途径相关
            3.3.3 FAdV-4 入侵LMH细胞不依赖胞内酸性环境但需要Dynamin参与
            3.3.4 FAdV-4 入侵LMH细胞依赖于小窝蛋白介导的内吞途径
            3.3.5 FAdV-4 入侵LMH依赖于巨胞饮途径且需要PI3K的参与
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
附录
致谢
个人简介



本文编号：3736935