携带双串联卵清蛋白T细胞表位的兔出血症病毒样颗粒的表达及免疫原性研究

发布时间：2023-02-09 17:13

　　兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease, RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起的一种以全身实质器官出血为主要特征的急性、败血性、高度接触传染性、致死性的兔病。RHDV属杯状病毒科兔病毒属,无囊膜,为20面体对称结构,直径40 nm,结构简单。RHDV仅有一个主要结构蛋白VP60,可自我组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs).有研究证实这种病毒样颗粒也可嵌合表达外源基因,或作为疫苗载体。为探究兔出血症病毒样颗粒(VP60-VLPs)是否有作为外源表位载体的能力,本文利用双串联的OVA257-264CD8+T细胞表位(序列为SIINFEKL,以柔性氨基酸GS连接)对RHDV VP60的不同位点进行插入和取代,研究其对嵌合蛋白的表达和病毒样颗粒组装的影响,并通过电镜观察和动物实验,研究VP60 VLPs作为外源片段展示载体的可行性和耐受性。实验过程如下：1.重组穿梭载体的构建 通过运用基因克隆和重组技术将双串联OVA CD8+T细胞表位(GSSIINFEKLGSS...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表(Abbreviation)
第一篇 文献综述
    1 兔出血症病毒
        1.1 RHD的发病史
        1.2 RHDV的分类
        1.3 RHDV病原
        1.4 临床症状和病理变化
        1.5 RHDV的流行病学
        1.6 预防,控制和预防接种
        1.7 RHDV的治疗应用
        1.8 小结
    2 病毒样颗粒
        2.1 病毒样颗粒的起源
        2.2 病毒样颗粒的特点
        2.3 病毒样颗粒的表达系统
        2.4 嵌合VLPs的产生
        2.5 VLPs疫苗的生产应用
    参考文献
第二篇 实验部分
    第一章 三种携带双串联OVA T细胞表位的重组穿梭载体的构建
        1 材料与方法
            1.1 质粒、细胞、菌种
            1.2 主要试剂与工具酶
            1.3 核酸序列分析
            1.4 引物设计
            1.5 构建示意图
            1.6 目的片段的构建
            1.7 穿梭载体Bacmid的构建
        2 实验结果
            2.1 目的基因的构建
            2.2 重组表达载体的酶切鉴定
            2.3 目的基因pFastBac1-DC的构建
            2.4 重组质粒的酶切鉴定
            2.5 重组穿梭载体鉴定
        3 讨论
            3.1 SOE技术
            3.2 外源表位插入位置的选择
        参考文献
    第二章 三种嵌合蛋白的表达及鉴定
        1 材料与方法
            1.1 质粒、菌株与细胞
            1.2 主要试剂与工具酶
            1.3 重组穿梭载体转染Sf9细胞
            1.4 重组杆状病毒的初步鉴定
            1.5 表达产物的鉴定
        2 结果
            2.1 转染
            2.2 RT-PCR鉴定重组病毒的mRNA
            2.3 血凝实验
            2.4 免疫荧光
            2.5 重组蛋白的表达及免疫印迹鉴定
        3 讨论
            3.1 嵌合蛋白载体和外源表位的表达
            3.2 表达系统的选择
            3.3 嵌合蛋白的血凝特性
        参考文献
    第三章 嵌合蛋白的自聚能力和免疫原性研究
        1 材料与方法
            1.1 试剂、培养基和病毒
            1.2 实验动物
            1.3 病毒样颗粒的电镜观察
            1.4 嵌合蛋白免疫原性的研究
        2 结果
            2.1 电镜观察
            2.2 嵌合蛋白载体特异性抗体效价的测定
            2.3 ELISPOT检测特异性IFN-γ分泌
        3 讨论
            3.1 病毒样颗粒的形成
            3.2 免疫原性的研究
        参考文献
全文总结
附录
致谢



本文编号：3738931