miR-509-5p靶向NF-κB通路调控抗绵羊支原体肺炎分子机制的研究
发布时间：2023-02-10 20:25
目的:本试验以研究绵羊支原体肺炎的抗病分子机制为目的,通过生物信息学的方法筛选,以期得到与MBL抗绵羊支原体肺炎相关的差异microRNA(miRNA)及基因,确定靶基因的生物学功能,并在细胞水平上进行验证,深入研究其在绵羊支原体肺炎中的调控机制,为丰富抗支原体肺炎的分子机制奠定基础。方法:(1)miRNA在MBL抗绵羊支原体肺炎中可能起到关键作用,利用生物信息学方法联合分析本课题组前期研究建立的高通量测序数据库和转录组测序数据库,筛选差异表达的miRNA及基因,TargetScan等软件预测差异表达miRNA的靶基因。(2)分别构建含有靶基因TRAF6 3’-UTR区的野生型和突变型的报告基因,利用Dual-Luciferase?Reporter Assay System验证miR-509-5p对靶基因TRAF6的靶向调控作用。(3)呼吸道黏膜上皮是绵羊支原体肺炎的关键宿主,通过原代培养绵羊呼吸道黏膜上皮细胞,将miR-509-5p mimic、miR-509-5p mimic NC、miR-509-5p inhibitor以及miR-509-5p inhibitor NC转染至该细...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
课题来源
摘要
Abstract
主要缩写词
第一章 绪论
1 论文研究的目的与意义
2 国内外研究进展
2.1 绵羊支原体肺炎
2.2 甘露聚糖结合凝集素
2.3 微小RNA
2.4 免疫调控通路
3 研究内容与技术路线
4 技术路线
第二章 试验研究
试验一mi RNA-mRNA联合分析筛选MBL抗绵羊支原体肺炎的差异基因
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 差异表达miRNA分析
3.2 qRT-PCR验证
3.3 靶基因预测
3.4 转录组测序数据库筛选分析差异表达基因
3.5 差异miRNA靶基因富集分析
4 讨论
5 小结
试验二双荧光素酶报告系统鉴定oar-miR-509-5p对 TRAF6 基因的靶向调控
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 oar-miR-509-5p的靶基因预测
3.2 psiCHECKTM-2 野生型和突变型载体构建与鉴定
3.3 293T细胞培养转染
3.4 oar-miR-509-5p对 TRAF6 表达的影响
4 讨论
5 小结
试验三miR-509-5p对呼吸道黏膜上皮细胞及NF-κB通路中相关基因影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 绵羊呼吸道黏膜上皮细胞形态学观察
3.2 呼吸道黏膜上皮细胞的免疫组化染色
3.3 miR-509-5p对 NF-κB通路中相关基因的影响
4 讨论
5 小结
试验四miR-509-5p在 MO感染呼吸道黏膜上皮细胞NF-κB信号通路中的作用
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 实验方法
3 试验结果
3.1 测序结果SNP分析
3.2 PI染色法检测细胞死亡率
3.3 NF-κB通路中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子标准曲线图
3.4 细胞培养液上清中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1βELISA检测结果
3.5 NF-κB通路中TRAF6 等基因实时荧光定量结果
4 讨论
5 小结
第三章 结论
第四章 论文创新点
参考文献
致谢
作者简介
附件
本文编号：3739855
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
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课题来源
摘要
Abstract
主要缩写词
第一章 绪论
1 论文研究的目的与意义
2 国内外研究进展
2.1 绵羊支原体肺炎
2.2 甘露聚糖结合凝集素
2.3 微小RNA
2.4 免疫调控通路
3 研究内容与技术路线
4 技术路线
第二章 试验研究
试验一mi RNA-mRNA联合分析筛选MBL抗绵羊支原体肺炎的差异基因
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 差异表达miRNA分析
3.2 qRT-PCR验证
3.3 靶基因预测
3.4 转录组测序数据库筛选分析差异表达基因
3.5 差异miRNA靶基因富集分析
4 讨论
5 小结
试验二双荧光素酶报告系统鉴定oar-miR-509-5p对 TRAF6 基因的靶向调控
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 oar-miR-509-5p的靶基因预测
3.2 psiCHECKTM-2 野生型和突变型载体构建与鉴定
3.3 293T细胞培养转染
3.4 oar-miR-509-5p对 TRAF6 表达的影响
4 讨论
5 小结
试验三miR-509-5p对呼吸道黏膜上皮细胞及NF-κB通路中相关基因影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 试验方法
3 试验结果
3.1 绵羊呼吸道黏膜上皮细胞形态学观察
3.2 呼吸道黏膜上皮细胞的免疫组化染色
3.3 miR-509-5p对 NF-κB通路中相关基因的影响
4 讨论
5 小结
试验四miR-509-5p在 MO感染呼吸道黏膜上皮细胞NF-κB信号通路中的作用
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.2 实验方法
3 试验结果
3.1 测序结果SNP分析
3.2 PI染色法检测细胞死亡率
3.3 NF-κB通路中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子标准曲线图
3.4 细胞培养液上清中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1βELISA检测结果
3.5 NF-κB通路中TRAF6 等基因实时荧光定量结果
4 讨论
5 小结
第三章 结论
第四章 论文创新点
参考文献
致谢
作者简介
附件
本文编号：3739855
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