山东地区H9N2禽流感流行病学调查及流行毒株分子生物学检测

发布时间：2023-02-20 20:01

　　为了解近期山东地区禽源H9N2亚型禽流感发病流行状况及流行毒株分子遗传进化特征,对2012-2013年山东各地送检的种鸡、商品蛋鸡以及商品肉鸡6385份血清进行了检测分析,对35例疑似病例进行了临床综合诊断分析,对部分H9N2亚型AIV分离株通过RT-PCR扩增病毒的HA基因片段,进行测序及遗传进化分析,并对这些病毒的受体结合性进行了检测分析。结果表明:山东地区免疫鸡群H9亚型的HI抗体水平较高,尤其是种鸡和商品蛋鸡大多数平均高于8个滴度。相比而言,商品肉鸡和商品蛋鸡群免疫合格率较低,疑似感染鸡群的比例较高,鸡群免疫状态不容乐观,感染风险较大;种鸡群免疫合格率较高,疑似感染鸡群的比例较低,鸡群免疫状态较好,感染发病的风险较低。两年度相比各类鸡群抗体水平具有一定的差异性,2013年各类鸡群的免疫状态明显好于2012年;对送检的35例疑似病例经过综合诊断,19例确诊为H9N2亚型禽流感,确诊病鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化均符合H9N2亚型禽流感的疾病特征;分离鉴定病毒17株,对其中6株病毒进行了分子生物学特性检测。6株H9N2亚型AIV分离株的HA基因在HA1和HA2的氨基酸裂解...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽流感病毒的病原学特性
        1.1.1 病毒的形态结构
        1.1.2 AIV命名原则
        1.1.3 基因结构以及编码的主要结构蛋白
        1.1.4 理化特性
    1.2 H9N2流感病毒的分子流行病学特征
        1.2.1 H9N2流感病毒对禽的感染
        1.2.2 H9N2流感病毒对猪的感染
        1.2.3 H9N2流感病毒对人的感染
    1.3 H9N2流感病毒的致病特点
        1.3.1 致病性
        1.3.2 传播性
        1.3.3 流行性
        1.3.4 禽流感病毒的遗传变异
        1.3.5 受体结合特性
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病料来源
        2.1.2 SPF鸡胚
        2.1.3 抗原
        2.1.4 引物
        2.1.5 试剂
        2.1.6 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 红细胞凝集试验（HA）
        2.2.2 红细胞凝集抑制试验（HI）
        2.2.3 组织病理学观察
        2.2.4 红细胞法测定AIV受体结合特性
        2.2.5 病毒的增殖
        2.2.6 病毒总RNA提取
        2.2.7 反转录cDNA合成
        2.2.8 基因片段的扩增
        2.2.9 PCR扩增产物的纯化与回收
        2.2.10 基因片段的克隆与测序
        2.2.11 质粒的提取与保存
        2.2.12 基因序列分析
        2.2.13 系统进化树分析
3 结果
    3.1 送检血清抗体水平检测
    3.2 疑似病例综合诊断
        3.2.1 发病鸡群的临床症状
        3.2.2 剖检病理变化
        3.2.3 组织病理学变化
    3.3 病毒检测及分离鉴定
        3.3.1 病毒分离鉴定
        3.3.2 分离株序列测定HA基因RT-PCR扩增
        3.3.3 关键氨基酸位点分析
        3.3.4 基因进化树分析
        3.3.5 红细胞法测定病毒受体结合特性
4 讨论
    4.1
    4.2
    4.3
5 结论
    5.1
    5.2
    5.3
    5.4
参考文献
致谢



本文编号：3747223