牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

发布时间：2023-02-26 19:36

　　为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 抗原及血清
    1.2 主要试剂
    1.3 确定抗原包被浓度和阴、阳血清稀释度
    1.4 选择最佳包被液
    1.5 选择最佳包被时间
    1.6 确定最佳封闭液
    1.7 选择封闭时间
    1.8 确定血清最适作用时间
    1.9 确定最佳酶标二抗工作浓度
    1.1 0 最佳底物作用时间的优化
    1.1 1 确定临界值
    1.1 2 特异性试验
    1.1 3 敏感性试验
    1.1 4 重复性试验
    1.1 5 与商品化试剂盒的比较试验
2 结果与分析
    2.1 最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度的确定
    2.2 最佳包被液的选择
    2.3 最佳封闭液和封闭时间的确定
    2.4 血清最适作用时间的确定
    2.5 最佳酶标二抗工作浓度的确定
    2.6 底物工作时间的确定
    2.7 间接ELISA阴阳性临界值的确定
    2.8 特异性试验
    2.9 敏感性试验
    2.1 0 重复性试验
    2.1 1 与商品化试剂盒的对比试验
3 讨论



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