狂犬病毒强弱毒株差异性激活星状胶质细胞天然免疫通路的机制研究
发布时间：2023-02-26 20:36
狂犬病是一种古老的疾病,一直对全世界的公共卫生造成极大的威胁,并导致每年约59000死于狂犬病。狂犬病的致病原为狂犬病毒(Rabies virus,RABV),其逃逸宿主中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)天然免疫的机制目前仍未完全清楚。我们之前的研究发现,在小鼠和犬感染模型中,狂犬病毒实验室固定毒株(弱毒株)能够激活天然免疫反应,而野毒株则不能激活。星状胶质细胞是组成血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)的重要元件,其被证实可在中枢神经系统中通过激活天然免疫和调控BBB通透性来限制或清除病原微生物的感染,对中枢神经系统起到重要的保护作用。本文研究中,我们重点探索了星状胶质细胞在狂犬病毒感染时发挥的各方面功能。首先,为了验证本研究中所使用的狂犬病毒(DRV-AH08,简称DRV)具有野毒株的特性,我们建立了小鼠感染模型,发现DRV感染的小鼠死亡时间明显早于弱毒株B2c感染的小鼠,且DRV感染小鼠后并未表现出炎症反应和外周免疫细胞入侵中枢神经系统的现象,表明本研究中所使用的野毒株DRV具有野生型狂犬病毒的特性,符合后续实验需求。其次,我...
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
第一章 研究进展综述
1 狂犬病毒
1.1 狂犬病毒的种属分类
1.2 狂犬病毒的基因组成结构
1.3 狂犬病毒的感染周期
1.4 病毒RNA转录复制的调控
1.5 狂犬病毒感染宿主全过程
1.6 实验室操作的狂犬病毒
1.7 狂犬病毒侵入中枢神经系统的机制
1.8 狂犬病毒逆向转运机制
2 狂犬病毒激发天然免疫反应与逃逸天然免疫的机制研究进展
2.1 针对狂犬病毒感染的天然免疫反应
2.2 狂犬病毒逃逸天然免疫反应的机制研究进展
2.2.1 P蛋白在狂犬病毒逃逸天然免疫反应中的研究进展
2.2.2 N蛋白对狂犬病毒逃逸天然免疫的影响
2.2.3 M蛋白对狂犬病毒逃逸天然免疫的影响
2.2.4 G蛋白对狂犬病毒致病性的影响
2.2.5 狂犬病毒逃逸凋亡的发生
3 血脑屏障BBB
4 星状胶质细胞
第二章 研究目的与意义
第三章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 细胞、毒株、菌株和小鼠
3.1.2 工具酶及主要试剂
3.1.3 培养基及其配制
3.1.4 主要缓冲液与相关试剂及其配制
3.1.5 主要实验仪器及设备
3.1.6 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 强毒弱毒小鼠致病性感染模型的建立
3.2.2 原代神经类细胞的分离培养
3.2.3 病毒感染细胞
3.2.4 抑制剂处理细胞
3.2.5 重组病毒表达B2c-DRV-(N,P,G或M)的构建与拯救
3.2.6 病毒滴定
3.2.7 WesternBlot检测蛋白表达
3.2.8 细胞免疫荧光实验
3.2.9 细胞样品总RNA的提取、RT-PCR及实时定量PCR
3.2.10 IFN敏感性试验
3.2.11 体外BBB模型的建立
3.2.12 细胞因子、趋化因子的定量分析
3.2.13 数据统计与分析
第四章 结果与分析
4.1 强毒株、弱毒株小鼠感染模型的建立
4.2 狂犬病毒野毒株持续性感染原代星状胶质细胞
4.3 狂犬病毒野毒株能够持续感染人源星状胶质细胞
4.4 狂犬病毒野毒能感染小鼠脑中的星状胶质细胞
4.5 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞激发更强的MAVS信号通路
4.6 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞产生更多的IFN
4.7 狂犬病毒弱毒感染星状细胞产生更多的dsRNA
4.8 MAVS是狂犬病毒弱毒株暂时性感染星状胶质细胞的关键天然免疫通路
4.9 狂犬病毒弱毒株能感染MAVS基因敲除的小鼠脑部星状胶质细胞
4.10 MAVS是抵抗狂犬病毒弱毒株感染的重要信号分子
4.11 TBK1在星状胶质细胞抵抗狂犬病毒弱毒株感染中发挥作用
4.12 狂犬病毒野毒株的N、P、G并不能改变其感染星状细胞的能力
4.13 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞产生大量细胞因子
4.14 星状胶质细胞产生的炎症因子调控BBB通透性
第五章 讨论
第六章 总结
参考文献
附录
发表论文
致谢
本文编号：3750852
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
第一章 研究进展综述
1 狂犬病毒
1.1 狂犬病毒的种属分类
1.2 狂犬病毒的基因组成结构
1.3 狂犬病毒的感染周期
1.4 病毒RNA转录复制的调控
1.5 狂犬病毒感染宿主全过程
1.6 实验室操作的狂犬病毒
1.7 狂犬病毒侵入中枢神经系统的机制
1.8 狂犬病毒逆向转运机制
2 狂犬病毒激发天然免疫反应与逃逸天然免疫的机制研究进展
2.1 针对狂犬病毒感染的天然免疫反应
2.2 狂犬病毒逃逸天然免疫反应的机制研究进展
2.2.1 P蛋白在狂犬病毒逃逸天然免疫反应中的研究进展
2.2.2 N蛋白对狂犬病毒逃逸天然免疫的影响
2.2.3 M蛋白对狂犬病毒逃逸天然免疫的影响
2.2.4 G蛋白对狂犬病毒致病性的影响
2.2.5 狂犬病毒逃逸凋亡的发生
3 血脑屏障BBB
4 星状胶质细胞
第二章 研究目的与意义
第三章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 细胞、毒株、菌株和小鼠
3.1.2 工具酶及主要试剂
3.1.3 培养基及其配制
3.1.4 主要缓冲液与相关试剂及其配制
3.1.5 主要实验仪器及设备
3.1.6 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 强毒弱毒小鼠致病性感染模型的建立
3.2.2 原代神经类细胞的分离培养
3.2.3 病毒感染细胞
3.2.4 抑制剂处理细胞
3.2.5 重组病毒表达B2c-DRV-(N,P,G或M)的构建与拯救
3.2.6 病毒滴定
3.2.7 WesternBlot检测蛋白表达
3.2.8 细胞免疫荧光实验
3.2.9 细胞样品总RNA的提取、RT-PCR及实时定量PCR
3.2.10 IFN敏感性试验
3.2.11 体外BBB模型的建立
3.2.12 细胞因子、趋化因子的定量分析
3.2.13 数据统计与分析
第四章 结果与分析
4.1 强毒株、弱毒株小鼠感染模型的建立
4.2 狂犬病毒野毒株持续性感染原代星状胶质细胞
4.3 狂犬病毒野毒株能够持续感染人源星状胶质细胞
4.4 狂犬病毒野毒能感染小鼠脑中的星状胶质细胞
4.5 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞激发更强的MAVS信号通路
4.6 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞产生更多的IFN
4.7 狂犬病毒弱毒感染星状细胞产生更多的dsRNA
4.8 MAVS是狂犬病毒弱毒株暂时性感染星状胶质细胞的关键天然免疫通路
4.9 狂犬病毒弱毒株能感染MAVS基因敲除的小鼠脑部星状胶质细胞
4.10 MAVS是抵抗狂犬病毒弱毒株感染的重要信号分子
4.11 TBK1在星状胶质细胞抵抗狂犬病毒弱毒株感染中发挥作用
4.12 狂犬病毒野毒株的N、P、G并不能改变其感染星状细胞的能力
4.13 狂犬病毒弱毒株感染星状胶质细胞产生大量细胞因子
4.14 星状胶质细胞产生的炎症因子调控BBB通透性
第五章 讨论
第六章 总结
参考文献
附录
发表论文
致谢
本文编号：3750852
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