H9N2亚型禽流感病毒抗原性及其与HA基因变异的相关性研究

发布时间：2023-02-28 19:32

　　低致病性禽流感（H9N2）是危害商品肉鸡、高产蛋鸡和肉鸡的重要疫病。H9N2亚型禽流感灭活疫苗在控制H9N2的过程中发挥了重要作用，但自2009年以来，H9的免疫失败在免疫鸡群中仍时有发生,给养禽业造成了巨大的经济损失。近十年，中国禽病界一直试图在分子遗传水平上阐明H9N2亚型AIV的毒株变异趋势，分子流行病学方面已积累了大量的毒株资料和信息。但是，这些研究对信息的分析的深度不够，缺乏系统的对病毒抗原性与基因变异相关性的研究。 本研究分离测定了山东等地22株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因的全基因序列，从分子水平上了解H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异的趋势，首次筛选了六株不同分离年代，不同分支，不同分离地区H9N2亚型AIV的HA基因从抗原性变异方面及其与基因变异的相互关系进行系统的研究比较。进一步运用统计学软件，分析病毒的抗原性变化与HA基因变异相关性，从而揭示我国H9N2的遗传变异规律，为临床全面科学防控H9N2禽流感提供强有力的技术支持。 首先，对国内1998-2011年流行的22株H9N2分离株分别进行病原鉴定和HA基因的序列测定，结合在GenBank中公开的的国内外46株H9...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号说明 中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 禽流感的命名与病原特征
    1.1.1 禽流感的国际命名
    1.1.2 禽流感病毒结构
    1.1.3 禽流感病毒理化性质
1.2 H9N2 亚型禽流感的流行现状
1.3 H9N2 亚型禽流感病毒抗原性变异的研究现状
1.4 禽流感病毒的蛋白功能及毒力因子
    1.4.1 血凝素(HA)蛋白
    
1.4.1.1 禽流感病毒的致病力是由 HA 裂解位点处的氨基酸序列决定
    
1.4.1.2 受体结合位点附近的糖链的变化与 HA 裂解位点的关系
    1.4.2 禽流感病毒致病性与神经氨酸酶 NA 蛋白的关系
    1.4.3 禽流感病毒致病性与多聚酶复合物的关系
    1.4.4 基质蛋白
    1.4.5 禽流感病毒致病性与非结构蛋白的关系
    1.4.6 核蛋白与禽流感病毒致病性的关系
1.5 禽流感病毒的抗原变异
    1.5.1 抗原漂移
    1.5.2 抗原转变
1.6 HA 基因对病毒致病性的影响
1.7 禽流感病毒的复制与传播
    1.7.1 禽流感病毒的复制机理
    1.7.2 禽流感病毒的传播机制
1.8 HA 和 HI 实验的国家标准 GB/T18936-2003
    1.8.1 血凝(HA)试验(微量法)
    1.8.2 血凝抑制(HI)试验(微量法)
    1.8.3 HA 和 HI 试验用溶液的配制
    
1.8.3.1 阿氏液配制
    
1.8.3.2 1%鸡红细胞悬液制备
    
1.8.3.3 pH7.2、0.01mol/L 的 PBS 液配制
    
1.8.3.4 棉拭子用磷酸盐缓冲液(0.01mol/L、pH7.4，PBS)配制 2 材料和方法
2.1 实验材料
    2.1.1 毒株
    2.1.2 SPF 鸡及 SPF 鸡胚
    2.1.3 主要试剂
    2.1.4 引物设计
    2.1.5 主要仪器
    2.1.6 分子生物学分析软件
2.2 方法
    2.2.1 H9 病毒 HA 基因序列分析
    
2.2.1.1 病毒增殖
    
2.2.1.2 病毒 RNA 的提取
    
2.2.1.3 RT-PCR
    
2.2.1.4 连接、转化、鉴定与测序
    
2.2.1.5 HA 基因序列分析
    2.2.2 交叉中和试验
    
2.2.2.1 病毒 EID₅₀测定
    
2.2.2.2 阳性血清制备
    
2.2.2.3 血凝试验
    
2.2.2.4 血凝抑制试验(HI)
    
2.2.2.5 HI 交叉抑制试验
    
2.2.2.6 鸡胚交叉中和实验
    2.2.3 中和指数与 HA 基因同源性的相关比较 3 结果与分析
3.1 HA 基因序列分析
    3.1.1 病毒分离和鉴定
    3.1.2 HA 基因的 RT-PCR 结果
    3.1.3 HA 基因核苷酸测序结果
    3.1.4 HA 基因核苷酸序列同源性比较
    3.1.5 HA 基因裂解位点和分子特征分析
    3.1.6 HA 基因系统进化分析和毒株抗原性的选择
3.2 中和试验结果
    3.2.1 病毒 EID₅₀的测定
    3.2.2 HI 双交叉实验的中和效价
    
3.2.2.1 一免血清 H9--HI 结果
    
3.2.2.2 二免血清 H9--HI 结果
    
3.2.2.3 一免血清 HI 同源性
    
3.2.2.4 二免血清 HI 同源性
    3.2.3 鸡胚中和效价和相关指数
3.3 H9N2 亚型 AIV 中和指数与氨基酸同源性的相关性 4 讨论 5 结论 6 参考文献 7 致谢 8 作者简介及论文发表情况



本文编号：3751714