CTX-M型多重耐药鸡大肠埃希菌致病特性

发布时间：2017-05-18 07:08

  本文关键词：CTX-M型多重耐药鸡大肠埃希菌致病特性，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：耐药菌是导致人和动物细菌感染和死亡的主要原因之一,目前国内外学者对耐药菌的致病力改变趋势存在明显争议。鸡大肠杆菌病是临床常见的多发性疾病,其病原体为鸡大肠埃希菌,尤其是多重耐药性鸡大肠埃希菌,给养鸡业防控造成很大的困难。本试验旨在通过对产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)的鸡大肠埃希菌的PFGE分型、O抗原血清型、毒力因子携带情况及代表性毒力因子的体外相对表达量的研究,探讨产CTX-M型鸡大肠埃希菌的致病特性,以期为临床防控鸡大肠杆菌病提供理论依据。本试验对106株鸡大肠埃希菌进行PFGE分型,结果表明除15株菌外,91株鸡大肠埃希菌共可分为46个型,尽管亲缘关系较分散,但仍存在一定的克隆关系。P12克隆株和P3克隆株为优势克隆株,分别占检出菌株的13.19%和8.79%。与不产CTX-M的菌株相比,克隆在产CTX-M菌中发挥了较明显的作用,其中CTX-M-9菌克隆传播更为明显,有21株菌(53.85%)分属于4个克隆株。使用13种大肠埃希菌O抗原单因子血清检测106株鸡大肠埃希菌后,共有55株能鉴定出血清型。O8、O14和O36为本批受试菌中的常见血清型。不同CTX-M亚群的鸡大肠埃希菌优势血清型不同,且目前河南流行的CTX-M-9菌血清型较CTX-M-1菌血清型更复杂多变。在产CTX-M菌中检出了3株O26菌和4株O111菌,它们属于非O157的产志贺毒素大肠埃希菌,可能会导致产CTX-M菌感染的大面积流行。以多重PCR技术检测CTX-M-1菌、CTX-M-9菌和不产CTX-M菌携带33种毒力基因的情况。检测结果是3类受试菌毒力基因的携带种类趋于一致,其中feoB、fimH、traT和sitA在3类菌中检出率均较高。CTX-M-1亚群鸡大肠埃希菌中traT和irp-2基因和CTX-M-9亚群鸡大肠埃希菌中iroN、iss和irp-2基因的携带率显著高于不产CTX-M菌株。CTX-M-1亚群鸡大肠埃希菌中cvaC和sfaS的携带率要显著高于CTX-M-9亚群,而iroN和iss的携带率显著低于CTX-M-9亚群。推测产CTX-M鸡大肠埃希菌的致病力可能较强,且菌株的致病力可能还与其携带的CTX-M基因亚型有关。细菌的致病性不仅与其含有毒力基因种类及数量的多少有关,还与其表达量相关。本研究通过荧光定量PCR的方法来比较毒力基因iss,iroN在三类菌体外培养时的相对表达量的情况,结果表明,iss和iroN在体外的表达量在这3类鸡大肠埃希菌之间的差异均不显著。综上所述,我们分离的106株大肠埃希菌的PFGE型众多,亲缘关系较远,仍存在一定的克隆关系,血清型较多,且携带很多黏附素基因、铁相关基因、抗血清基因等各种毒力基因。本研究对河南地区鸡大肠埃希菌毒力基因的流行病学有了初步的了解,对敏感菌和耐药菌毒力的变化有了初步的探讨。从携带的毒力因子种类与数量来看,CTX-M-1菌与CTX-M-9菌的致病性可能强于敏感菌。但是iss基因iroN基因在体外的mRNA表达量在3类菌中无明显差异。
【关键词】：鸡大肠埃希菌 PFGE O抗原血清型鉴定 毒力基因 RT-PCR
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 致谢5-8
• 摘要8-10
• 文献综述10-18
• 1 禽大肠埃希菌毒力因子种类10-14
• 1.1 黏附素11-12
• 1.2 摄铁系统12
• 1.3 溶血素12
• 1.4 侵袭因子12-13
• 1.5 抗血清存活因子13
• 1.6 毒素13-14
• 2 禽大肠埃希菌毒力因子的分子流行病学14-16
• 2.1 毒力因子具有协同致病的特性14-15
• 2.2 毒力因子与血清型的相关性15
• 2.3 毒力因子与耐药性的相关性15-16
• 2.4 菌株种系发育背景与毒力因子间的关系16
• 3 耐药菌致病性差异的研究16-18
• 试验一 CTX-M鸡大肠埃希菌PFGE分型18-25
• 1 前言18
• 2 材料与方法18-20
• 3 结果与分析20-23
• 3.1 鸡大肠埃希菌PFGE电泳图及PFGE聚类分析图20-22
• 3.2 PFGE型与CTX-M亚型的关系22-23
• 4 讨论23-24
• 4.1 15 株鸡大肠埃希菌经PFGE处理后无结果的原因23
• 4.2 由鸡大肠埃希菌PFGE型探讨克隆传播在CTX-M快速散播中的作用23-24
• 5 小结24-25
• 试验二 CTX-M鸡大肠埃希菌O抗原血清型鉴定25-31
• 1 前言25
• 2 材料与方法25-27
• 3 结果与分析27-28
• 4 讨论28-30
• 4.1 55 株O抗原血清型定型菌株28-29
• 4.2 O26、O111型鸡大肠埃希菌29-30
• 5 小结30-31
• 试验三 CTX-M鸡大肠埃希菌毒力基因的流行特征31-40
• 1 前言31
• 2 材料与方法31-34
• 3 结果与分析34-38
• 3.1 三类鸡大肠埃希菌毒力基因的检测结果34-38
• 3.2 三类鸡大肠埃希菌毒力基因的差异分析38
• 4 讨论38-39
• 5 小结39-40
• 试验四 CTX-M鸡大肠埃希菌iss和iro N毒力基因体外相对表达量研究40-49
• 1 前言40
• 2 材料与方法40-43
• 3 结果与分析43-48
• 3.1 普通PCR检验用于荧光定量的毒力基因的引物43-44
• 3.2 标准曲线44-46
• 3.3 相对表达量46-48
• 3.3.1 待测菌株gap A基因和iss基因以及iro N基因的扩增曲线和融解曲线46-47
• 3.3.2 不同菌株间iss或iro N的m RNA相对表达量47-48
• 4 讨论48
• 5 小结48-49
• 全文结论49-50
• 本文创新点50-51
• 参考文献51-61
• 附录一：作者简介及发表的文章61-62
• 附录二：缩略词表62-63
• ABSTRACT63-64

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本文编号：375374