猪伪狂犬病活疫苗耐热保护剂及冻干工艺研究

发布时间：2023-03-05 14:27

　　本研究制苗用毒株为猪伪狂犬病病毒HB2000株，是由猪伪狂犬病病毒鄂A株经基因敲除技术缺失TK、gE、gI基因部分核苷酸得到的TK-/gE-/gp63-突变株(gp63基因即gI基因)，中和试验结果表明，HB2000株病毒能被PRV特异性血清中和；PCR结果证明，可扩增出特异性的748bp TK基因片段和514bp gE-gI基因片段，毒种特异性良好。 应用响应面法(RSM)，筛选并优化耐热保护剂配方，试验结果表明：谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐和D-山梨醇能够显著提高病毒对冻干环境的耐受能力；酶解酪蛋白、海藻糖、明胶、蔗糖和牛血清白蛋白显著性依次递减；以冻干后病毒保护率为响应值，响应面优化出最佳配方为：谷氨酸钠2%、L-精氨酸盐酸盐2%、酶解酪蛋白7.6%、D-山梨醇2%、明胶4%、海藻糖1%、牛血清白蛋白2%、蔗糖15.2%。采用该配方进行验证实验，冻干保护率达到80.40%；耐老化试验中37℃保存7日及2⁸℃保存24个月，病毒滴度下降分别为0.47、0.55、0.62及0.41、0.47、0.51，该配方制备的活疫苗热稳定性良好。 依据冻存试验和共熔点测定结果，...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
目录
外文缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 猪伪狂犬病病毒 TK、gE、gp63 基因
        1.1.1 猪伪狂犬病病毒 TK 基因结构与功能
        1.1.2 猪伪狂犬病病毒 gE 基因结构与功能
        1.1.3 猪伪狂犬病病毒 gI 基因结构与功能
        1.1.4 猪伪狂犬病病毒鄂 A 株的 TK-/gE-/gI-突变株
    1.2 耐热冻干保护剂
        1.2.1 耐热冻干保护剂基质分类
        1.2.2 耐热冻干保护剂保护机理
        1.2.3 耐热冻干保护剂配制和保存
        1.2.4 耐热冻干保护剂筛选方法
    1.3 冷冻干燥工艺
        1.3.1 冻干工艺程序
        1.3.2 耐热保护剂冻干工艺优化
        1.3.3 冻干过程中异常现象处理
    1.4 总结
第二章 猪伪狂犬病病毒鉴别及细胞培养
    2.1 引言
    2.2 试验材料
        2.2.1 毒种、细胞及鸡胚
        2.2.2 细胞培养主要试剂
        2.2.3 仪器
    2.3 方法
        2.3.1 猪伪狂犬病病毒 HB2000 株鉴别检验
        2.3.2 猪伪狂犬病病毒 HB2000 株的培养
    2.4 结果与分析
        2.4.1 猪伪狂犬病病毒 HB2000 株鉴别检验结果
        2.4.2 猪伪狂犬病病毒 HB2000 株的培养结果
    2.5 小结
    2.6 讨论
第三章 猪伪狂犬病病毒耐热保护剂筛选
    3.1 引言
    3.2 试验材料
        3.2.1 毒种及细胞
        3.2.2 细胞培养主要试剂
        3.2.3 主要保护剂
        3.2.4 仪器
    3.3 方法
        3.3.1 繁殖猪伪狂犬病病毒
        3.3.2 猪伪狂犬病病毒活疫苗冻干工艺流程
        3.3.3 保护剂基础配方筛选
        3.3.4 Plackett-Burman 试验确定影响病毒冻干保护率的显著因子
        3.3.5 Box-Burman 响应面试验优化各保护剂基质的浓度
        3.3.6 冻干验证试验
        3.3.7 疫苗耐老化试验
    3.4 结果与分析
        3.4.1 冻存试验结果
        3.4.2 冻干试验结果
        3.4.3 Plackett-Burman 设计及响应值
        3.4.4 Plackett-Burman 方差分析
        3.4.5 Box-Behnken 试验设计及响应值
        3.4.6 Box-Behnken 试验影响效果分析
        3.4.7 冻干验证试验结果
        3.4.8 耐老化试验结果
    3.5 小结
    3.6 讨论
第四章 猪伪狂犬病病毒耐热保护剂活疫苗冻干曲线优化
    4.1 引言
    4.2 试验材料
        4.2.1 细胞、病毒液
        4.2.2 主要保护剂原料
        4.2.3 仪器
    4.3 方法
        4.3.1 共熔点测定
        4.3.2 冻干基本参数的拟定
        4.3.3 冻干曲线优化
    4.4 结果与分析
        4.4.1 共熔点测定结果
        4.4.2 冻干基本参数的测定结果
        4.4.3 冻干曲线优化结果
    4.5 小结
    4.6 讨论
第五章 猪伪狂犬病病毒耐热保护剂活疫苗安全性、效力检验研究
    5.1 引言
    5.2 试验材料
        5.2.1 疫苗
        5.2.2 仪器与耗材
        5.2.3 实验动物
        5.2.4 血清及细胞
    5.3 方法
        5.3.1 健康易感猪筛选
        5.3.2 疫苗安全性检验
        5.3.3 疫苗效力检验
    5.4 结果与分析
        5.4.1 健康易感猪筛选结果
        5.4.2 疫苗安全性检验结果
        5.4.3 疫苗效力检验结果
    5.5 小结
    5.6 讨论
结论
参考文献
致谢
导师简介
作者简介



本文编号：3756363