转基因奶山羊乳汁中重组人乳铁蛋白的分离纯化与生物学活性分析

发布时间：2023-03-05 16:11

　　人乳铁蛋白(hLF)是一种具有广泛的生物学活性的铁结合糖蛋白。hLF基于其独特的生物学功能和理化性质,已广泛应用于食品、医疗、饲料添加剂等领域。然而,由于hLF来源的匮乏及加工过程造成的污染,使得其大规模的应用受到了限制。而乳腺生物反应器相对于传统的蛋白质表达系统,具有以较低的成本生产大量的活性蛋白的潜能。因此,利用基因工程技术开发重组人乳铁蛋白(rhLF)成为研究的热点和发展趋势。 在前期的研究工作中,本实验室构建了含有人乳铁蛋白cDNA的rhLF乳腺特异性表达载体,获得了乳腺特异性表达rhLF的转基因奶山羊。本研究选用了其中两只rhLF转基因奶山羊(L6-4、L3-1)的羊乳汁,经过分离纯化,鉴定其是否与hLF具有相一致的生物学活性。 分别收集转基因奶山羊L6-4、L3-1羊乳汁,离心去除脂肪,酸化沉淀去除酪蛋白,获得乳清。将乳清利用三次硫酸铵沉淀法最终得到沉淀物用超纯水溶解,溶解后的溶液用PBS(PH7.4)作为透析液透析24h,再经PEG20000浓缩至30mg/ml后进行Western-blotting检测。将上述浓缩后的溶液稀释至20mg/ml,以进样量为4ml,流速为0....

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一部分 文献综述
    1. 人乳铁蛋白的结构与生物学功能
        1.1 人乳铁蛋白的结构
        1.2 人乳铁蛋白的生物学功能
            1.2.1 抗菌功能
            1.2.2 参与铁的代谢
            1.2.3 抗病毒功能
            1.2.4 抗肿瘤功能
            1.2.5 抗氧化功能
            1.2.6 免疫调节功能
    2. 乳铁蛋白的分离纯化方法
        2.1 盐析法
        2.2 超滤法
        2.3 层析技术
            2.3.1 离子交换层析
            2.3.2 吸附层析
            2.3.3 亲和层析
            2.3.4 凝胶层析
    3. 转基因动物的生物安全性
    4. 转基因动物重组蛋白的研究进展
第二部分 正文
    第一章 奶山羊乳汁中重组人乳铁蛋白的提取
        1. 材料与试剂
            1.1 实验材料
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂及配制
        2. 实验方法
            2.1 重组人乳铁蛋白的粗提
            2.2 重组人乳铁蛋白粗提样品的检测
            2.3 重组人乳铁蛋白的纯化及检测
        3. 结果
            3.1 重组人乳铁蛋白粗提样品的蛋白浓度测定
            3.2 重组人乳铁蛋白粗提样品的Western-blotting检测
            3.3 重组人乳铁蛋白的凝胶过滤层析洗脱液的检测
            3.4 阳性洗脱峰收集液的浓缩及蛋白浓度测定
    第二章 转基因奶山羊乳汁中重组人乳铁蛋白的生物学活性分析
        1. 材料与试剂
            1.1 实验材料
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂及配制
        2. 实验方法
            2.1 重组人乳铁蛋白对大肠杆菌的抑菌实验
            2.2 重组人乳铁蛋白的铁离子结合实验
        3. 结果
            3.1 重组人乳铁蛋白对大肠杆菌的抑菌实验结果
            3.2 重组人乳铁蛋白的铁离子结合实验结果
第三部分 全文讨论
    1.1 重组人乳铁蛋白的分离提纯
    1.2 重组人乳铁蛋白的生物学活性分析
参考文献
致谢



本文编号：3756512