受到田鼠巴贝虫侵染后小鼠肝脏的定量和磷酸化蛋白质组学分析
发布时间：2023-03-05 17:56
田鼠巴贝虫(Babesia microti)是寄生于鼠、人或其他哺乳动物红细胞内的一种血液原虫,可引起人兽共患病。被田鼠巴贝虫侵染的宿主出现发热、贫血和血红蛋白尿等一系列临床症状,造成宿主的肝脏和肾脏损伤。免疫力低下者如果患田鼠巴贝虫病,同时可诱发多种并发症,甚至导致死亡。田鼠巴贝虫分布广泛,主要分布于美洲、欧洲、亚洲和非洲等地,中国也是该病发生的主要国家之一,对畜牧业的发展和人类的健康构成了严重威胁,对其研究具有重要意义。本研究发现小鼠被田鼠巴贝虫侵染后,肝脏组织受到了严重损伤,出现明显肿胀,细胞质内脂滴沉积,细胞外形和线粒体等细胞器发生形态改变。为了更深入的探究田鼠巴贝虫引起肝脏损伤的分子机制,我们运用DIA定量蛋白质组学方法,研究了小鼠被田鼠巴贝虫侵染后的感染期至恢复期,肝脏组织中全部蛋白质表达量以及磷酸化修饰的变化,探究肝脏在损伤和修复过程中蛋白质变化的规律和作用。为研究田鼠巴贝虫对宿主造成的损伤和机体修复机制奠定基础,为更有效地诊断和治疗该疾病提供新思路和新方法。感染田鼠巴贝虫的宿主肝脏组织中全部蛋白质的质谱鉴定结果显示,感染第0 d、5d、8 d、11 d和19 d共鉴定到...
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 巴贝虫及巴贝虫病简介
1.2 蛋白质组学
1.2.1 蛋白质组学定义
1.2.2 定量蛋白质组学
1.3 蛋白质翻译后修饰
1.3.1 蛋白质翻译后修饰
1.3.2 蛋白质磷酸化修饰的定义、富集方法及在田鼠巴贝虫方面的研究进展
1.4 利用蛋白质组学方法开展巴贝虫相关研究
1.5 研究目的和意义
第二章 小鼠感染田鼠巴贝虫后肝脏组织的病理学变化
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器及耗材
2.2 实验步骤
2.2.1 小鼠模型建立
2.2.2 组织解剖观察
2.2.3 HE染色石蜡切片制备
2.2.4 透射电镜样品制备
2.3 实验结果
2.3.1 吉姆萨血涂片观察
2.3.2 肝脏组织解剖观察
2.3.3 光学显微镜和透射电子显微镜观察
2.4 讨论
第三章 小鼠感染田鼠巴贝虫后肝脏组织的蛋白质组学变化
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器及耗材
3.2 实验步骤
3.2.1 被田鼠巴贝虫侵染小鼠的饲养及肝脏解剖
3.2.2 蛋白提取
3.2.3 蛋白酶解及脱盐
3.2.4 TiO2 磷酸化富集
3.2.5 高效液相色谱(HPLC)反相分级分离
3.2.6 DDA质谱分析建立谱图库
3.2.7 DIA质谱分析
3.2.8 生物信息学分析
3.2.8.1 质谱数据鉴定结果统计
3.2.8.2 质谱数据聚类分析
3.2.8.3 GO功能注释分析
3.2.8.4 KEGG通路分析
3.2.8.5 蛋白质互作分析
3.2.9 PRM验证
3.2.9.1 筛选进行PRM验证的蛋白质
3.2.9.2 PRM质谱分析
3.2.9.3 Skyline搜库分析
3.3 实验结果
3.3.1 肝脏组织全蛋白实验结果
3.3.1.1 蛋白质鉴定
3.3.1.2 差异表达蛋白聚类分析
3.3.1.3 差异表达蛋白质的GO注释分析
3.3.1.4 四个Cluster中蛋白质的GO注释分析
3.3.1.5 差异表达蛋白质的KEGG通路分析
3.3.1.6 差异表达蛋白质的互作分析
3.3.1.7 PRM验证分析
3.3.2 肝脏组织磷酸化蛋白实验结果
3.3.2.1 磷酸化蛋白质定量结果
3.3.2.2 差异修饰磷酸化肽段的聚类分析
3.3.2.4 差异修饰磷酸化蛋白质的GO注释分析
3.3.2.5 四个Cluster中的磷酸化蛋白质分别进行GO注释分析
3.3.2.6 差异修饰磷酸化蛋白质的KEGG通路分析
3.3.2.7 差异修饰磷酸化蛋白质的互作分析
3.4 讨论
3.4.1 与脂质代谢相关的蛋白
3.4.2 与免疫相关的蛋白
3.4.3 与机体生长发育相关蛋白
参考文献
攻读学位期间取得的科研成果清单
致谢
本文编号：3756664
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 巴贝虫及巴贝虫病简介
1.2 蛋白质组学
1.2.1 蛋白质组学定义
1.2.2 定量蛋白质组学
1.3 蛋白质翻译后修饰
1.3.1 蛋白质翻译后修饰
1.3.2 蛋白质磷酸化修饰的定义、富集方法及在田鼠巴贝虫方面的研究进展
1.4 利用蛋白质组学方法开展巴贝虫相关研究
1.5 研究目的和意义
第二章 小鼠感染田鼠巴贝虫后肝脏组织的病理学变化
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器及耗材
2.2 实验步骤
2.2.1 小鼠模型建立
2.2.2 组织解剖观察
2.2.3 HE染色石蜡切片制备
2.2.4 透射电镜样品制备
2.3 实验结果
2.3.1 吉姆萨血涂片观察
2.3.2 肝脏组织解剖观察
2.3.3 光学显微镜和透射电子显微镜观察
2.4 讨论
第三章 小鼠感染田鼠巴贝虫后肝脏组织的蛋白质组学变化
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器及耗材
3.2 实验步骤
3.2.1 被田鼠巴贝虫侵染小鼠的饲养及肝脏解剖
3.2.2 蛋白提取
3.2.3 蛋白酶解及脱盐
3.2.4 TiO2 磷酸化富集
3.2.5 高效液相色谱(HPLC)反相分级分离
3.2.6 DDA质谱分析建立谱图库
3.2.7 DIA质谱分析
3.2.8 生物信息学分析
3.2.8.1 质谱数据鉴定结果统计
3.2.8.2 质谱数据聚类分析
3.2.8.3 GO功能注释分析
3.2.8.4 KEGG通路分析
3.2.8.5 蛋白质互作分析
3.2.9 PRM验证
3.2.9.1 筛选进行PRM验证的蛋白质
3.2.9.2 PRM质谱分析
3.2.9.3 Skyline搜库分析
3.3 实验结果
3.3.1 肝脏组织全蛋白实验结果
3.3.1.1 蛋白质鉴定
3.3.1.2 差异表达蛋白聚类分析
3.3.1.3 差异表达蛋白质的GO注释分析
3.3.1.4 四个Cluster中蛋白质的GO注释分析
3.3.1.5 差异表达蛋白质的KEGG通路分析
3.3.1.6 差异表达蛋白质的互作分析
3.3.1.7 PRM验证分析
3.3.2 肝脏组织磷酸化蛋白实验结果
3.3.2.1 磷酸化蛋白质定量结果
3.3.2.2 差异修饰磷酸化肽段的聚类分析
3.3.2.4 差异修饰磷酸化蛋白质的GO注释分析
3.3.2.5 四个Cluster中的磷酸化蛋白质分别进行GO注释分析
3.3.2.6 差异修饰磷酸化蛋白质的KEGG通路分析
3.3.2.7 差异修饰磷酸化蛋白质的互作分析
3.4 讨论
3.4.1 与脂质代谢相关的蛋白
3.4.2 与免疫相关的蛋白
3.4.3 与机体生长发育相关蛋白
参考文献
攻读学位期间取得的科研成果清单
致谢
本文编号：3756664
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