广谱识别PRRS病毒单克隆抗体在ELISA法中检测病毒的应用及编码序列测定

发布时间：2023-03-10 20:16

　　猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,俗称猪蓝耳病)是严重危害全世界生猪养殖产业的疫病。多年来PRRSV在我国长期且大范围流行并且已经造成极为严重的经济损失。本研究的目的就是利用抗PRRSV M蛋白的单克隆抗体、通过捕获PRRSV抗原来确立一种ELISA检测技术,主要用于PRRS的诊断和监测,同时对该单克隆抗体进行纯化和轻链重链编码序列测定并与Pub Med上已公布的小鼠抗体编码基因进行比对。结果主要包括以下几方面:1、通过对纯化后单抗亚型鉴定,该单抗亚型为IgG2b,而后用Protein G Resin层析柱来纯化Ig G。纯化后的PRRSV Anti-M-Mab凝胶电泳图中条带清楚且无杂带,说明纯化后的Anti-M-Mab纯度较高,杂蛋白较少。另外,对杂交瘤细胞进行基因组测序,结果验证该单克隆抗体为胚系基因所编码,序列比对显示其整体编码序列与胚系可变区基因的同源性高达99%,无体细胞突变和亲和力成熟的过程。2、将SD16,GD-HD,JXA1,VR2332,VR2385,CH1a,NADC30L-Lik分别接种于易感细胞Mac145,通过IFA用杂交瘤上清检测上述毒株,结果可知上述7种毒株...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要 abstract 第一章 猪繁殖与呼吸综合征研究进展
1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)
    1.1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的分类
    1.1.2 PRRSV病毒的分子生物学特性
1.2 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)及其流行病学调查
1.3 PRRSV的流行病学调查
    1.3.1 国外PRRSV流行病学调查及分子生物学特征
    1.3.2 国内PRRSV流行病学现状及毒株的分子生物学特征
1.4 PRRSV抗体及病原诊断方法研究进展
    1.4.1 PRRSV的血清学诊断
    1.4.2 PRRSV的病原诊断
    1.4.3 比较与讨论 第二章 ANTI-M-MAB单克隆抗体的纯化与鉴定
2.1 材料
    2.1.1 杂交瘤细胞
    2.1.2 主要仪器
    2.1.3 主要试剂
    2.1.4 主要试剂的配制
2.2 实验方法
    2.2.1 杂交瘤细胞培养上清的纯化
    2.2.2 单克隆抗体Anti-M-Mab的亚型鉴定
    2.2.3 杂交瘤细胞中RNA的提取及测序
2.3 结果
    2.3.1 单克隆抗体亚型鉴定
    2.3.2 SDS-PAGE检测纯化后的抗体的纯度
    2.3.3 纯化抗体的浓度测定
    2.3.4 RNA提取及测序结果
2.4 讨论 第三章 ANTI-M-MAB单克隆抗体对不同PRRSV毒株的反应性检测
3.1 材料
    3.1.1 病毒与细胞
    3.1.2 主要设备和仪器
    3.1.3 主要试剂
    3.1.4 主要试剂的配制
3.2 实验方法
    3.2.1 Mac145细胞的培养
    3.2.2 PRRSV增殖与病毒滴度测定
    3.2.3 用间接免疫荧光(IFA)的方法检测Anti-M-Mab与不同毒株的反应性
    3.2.4 用间接ELISA的方法检测Anti-M-Mab识别的抗原表位的性质
3.3 结果
    3.3.1 M与PRRSV不同毒株的反应结果
    3.3.2 Anti-M-Mab所识别的表位性质
3.4 讨论 第四章 双抗夹心ELISA检测方法的建立与优化
4.1 材料
    4.1.1 主要设备与仪器
    4.1.2 主要试剂
    4.1.3 主要试剂与配置
4.2 实验方法
4.3 结果
    4.3.1 双抗夹心ELISA条件摸索
    4.3.2 双抗夹心ELISA检测PRRSV不同毒株
    4.3.3 最低检出量的确定
4.4 讨论 参考文献 附录 缩略词 致谢 作者简介



本文编号：3758497