绵羊卵母细胞及体外早期胚胎中nNOS、eNOS、iNOS的表达

发布时间：2023-03-11 01:07

　　一氧化氮(Nitric oxide,NO)作为一种具有自由基性质的多功能活性分子,在体内多种信号传递中起重要作用。体内的NO主要由一氧化氮合酶(NOS)催化产生,现已确认的NOS包含三种亚型：神经型(nNOS)、诱导型(iNOS)、内皮型(eNOS)。由于NO的半衰期非常短而且极不稳定,而NOS是NO产生的限速酶,因此NOS的表达量可以线性反映出NO的生成量。随着对NO的广泛研究,发现其与生殖存在着必不可少的某些联系,特别在动物个体发育的早期。为了了解一氧化氮合酶(NOS)的三个亚型在绵羊卵母细胞体外成熟及早期胚胎中的表达情况,本实验,运用体外培养体系获得未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞及不同发育时期的早期胚胎(2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚、囊胚),应用实时荧光定量PCR技术检测目标基因nNOS、eNOS、iNOS相对表达情况。结果显示： 1.在绵羊未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和早期胚胎发育各阶段,nNOS、eNOS、 iNOS mRNA均有表达。 2.绵羊卵母细胞成熟过程中,nNOS mRNA相对表达量在未成熟卵母细胞期及成熟卵母细胞期均显著高于eNOS、iNOS的表达量(p&l...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 前言
    1.1 一氧化氮的发现
    1.2 一氧化氮的性质
    1.3 一氧化氮的合成
        1.3.1 酶参与合成
        1.3.2 非酶合成途径
    1.4 一氧化氮合酶
        1.4.1 一氧化氮合酶的分类及命名
        1.4.2 一氧化氮合酶的结构及生物学特性
        1.4.3 一氧化氮合酶对一氧化氮生成的调控
    1.5 一氧化氮的作用机制
    1.6 一氧化氮的生物学作用
        1.6.1 一氧化氮与心血管系统
        1.6.2 一氧化氮与免疫系统
        1.6.3 一氧化氮与雄性生殖系统
        1.6.4 一氧化氮与雌性生殖系统
    1.7 研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料、试剂及主要仪器、耗材
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验主要试剂
        2.1.3 实验主要仪器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 卵巢的获得、运输及处理
        2.2.2 卵母细胞的收集
        2.2.3 卵母细胞的体外成熟
        2.2.4 冻精激活
        2.2.5 成熟卵母细胞的体外受精
        2.2.6 胚胎培养
        2.2.7 总RNA的提取
        2.2.8 总RNA的检测
        2.2.9 RT-PCR反应
        2.2.10 引物的设计与合成
        2.2.11 实时荧光定量PCR反应
3 结果与分析
    3.1 总RNA的检测
    3.2 实时荧光定量PCR结果
        3.2.1 扩增曲线和溶解曲线
        3.2.2 nNOS、eNOS、iNOS和GAPDH基因表达的荧光定量扩增效率曲线
        3.2.3 荧光定量PCR产物电泳检测及测序,
        3.2.4 NOS在卵母细胞体外成熟及早期胚胎中的相对表达
4 讨论
5 结论
致谢
参考文献
附录
作者简介



本文编号：3758900