大熊猫粪便及环境中大肠杆菌耐药性和质粒介导ESBLs酶耐药基因检测
发布时间：2023-03-11 08:18
大熊猫(Ailuropodamelanoloca)是我国特有的珍稀大型野生动物,属国家一级濒危保护动物。随着大熊猫人工圈养的增多,疾病发生是影响大熊猫繁育重要因素。大熊猫疾病发生以消化系统疾病为主,其中大肠杆菌是引起肠道感染的主要病原菌。兽医临床主要使用抗菌药物,尤其是使用β-内酰胺类药物控制大熊猫大肠杆菌病发生。随着药物的广泛使用或滥用,耐药大肠杆菌菌株迅速出现,这给野生动物感染性疾病的控制带来了困难。大肠杆菌除了是重要的病原菌,也是动物体内的重要共生菌,对共生菌耐药性的调查,有助于了解耐药菌株的产生和流行趋势,为控制和减少耐药的产生具有意义。本研究于2012年7月到2013年7月,从成都大熊猫繁育研究基地,采集大熊猫粪便和环境样本,分离鉴定出125株大肠杆菌共生菌,其中粪便源大肠杆菌96株,环境源大肠杆菌29株。采用药敏试验纸片扩散法,检测了菌株对18种抗菌药物(8种p-内酰胺类药物和10种非p-内酰胺类药物)的药物敏感性。结果显示,125株大肠杆菌共生菌对p-内酰胺类药物氨苄西林、头孢唑林和非β-内酰胺类药物四环素类、复方新诺明耐药较严重(耐药率范围30%～75%),菌株对头孢西...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文献综述
1 文献综述
1.1 大熊猫肠道菌群简介
1.2 耐药大肠杆菌的研究现状
1.3 大肠杆菌耐β-内酰胺类药物的耐药机制研究
1.4 大肠杆菌产ESBLs菌株耐药基因的传播机制
1.5 ESBLs和AmpC酶的检测
1.5.1 产ESBLs酶的表型鉴定方法
1.5.2 产AmpC酶的表型筛选
1.6 质粒ESBLs和AmpC酶基因的分子生物学检测方法
2 选题目的及意义
第二部分 试验研究
第一章 大熊猫粪便及环境中大肠杆菌耐药性监测
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样本的采集及质控菌株
1.1.2 主要药物
1.1.3 培养基
1.1.4 其他试剂
1.1.5 主要仪器和设备
1.2 方法
1.2.1 大肠杆菌的分离和纯化
1.2.2 大肠杆菌的鉴定
1.2.3 大肠杆菌菌株的保存
1.2.4 纸片扩散法检测菌株的药物敏感性
1.2.5 药敏结果的判断
1.2.6 数据分析
2 结果与分析
2.1 不同样本大肠杆菌的分离及鉴定结果
2.2 96株分离自大熊猫粪便大肠杆菌对药物的耐药情况
2.2.1 96株分离自大熊猫粪便大肠杆菌对药物的耐药率
2.2.2 粪便源大肠杆菌对药物的多重耐药
2.2.3 粪便源菌株对不同抗菌药物的交叉耐药性
2.3 29株分离自环境大肠菌对药物的耐药情况
2.3.1 29株环境源菌株对抗菌药物的耐药率
2.3.2 多重耐药
2.3.3 环境源菌株对不同抗菌药物的交叉耐药性
2.4 不同来源菌株对抗菌药物耐药性比较
2.4.1 不同来源菌株耐药率比较
2.4.2 不同来源菌株的多重耐药性比较
3 讨论
3.1 不同样本大肠杆菌菌株的分离情况
3.2 粪便源菌株对不同抗菌药物的耐药情况
3.2.1 96株粪便源大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药率
3.2.2 粪便源大肠杆菌的多重耐药性分析
3.2.3 粪便源大肠杆菌的交叉耐药性
3.3 环境源大肠杆菌的耐药性分析
3.3.1 29株环境源大肠杆菌的耐药性监测
3.3.2 29株环境源大肠杆菌的多重耐药性监测
3.3.3 环境源大肠杆菌的交叉耐药性
4 小结
第二章 大肠杆菌产ESBLs和AmpC酶及其基因型的检测
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
1.1.2 药敏纸片
1.1.3 培养基
1.1.4 其他试剂
1.1.5 主要仪器和设备
1.2 方法
1.2.1 大肠杆菌产ESBLs的初步筛选
1.2.2 大肠杆菌AmpC酶的初步筛选
1.2.3 产ESBLs和AmpC酶菌株质粒DNA的提取及电泳检测
1.2.4 大肠杆菌质粒ESBLs和AmpC酶的基因型检测
1.2.5 基因测序
1.2.6 数据分析
2 结果
2.1 产ESBLs和AmpC酶大肠杆菌的筛选
2.1.1 粪便源大肠杆菌产ESBLs酶菌株的筛选
2.1.2 环境源大肠杆菌产ESBLs酶菌株的筛选
2.1.3 产AmpC酶大肠杆菌的筛选
2.2 产ESBLs大肠杆菌的耐药性分析
2.3 ESBLs基因和AmpC酶基因检测
2.3.1 ESBLs基因的PCR扩增结果
2.3.2 AmpC酶基因的PCR扩增结果
2.4 基因测序结果
3 讨论
3.1 产ESBLs和AmpC酶大肠杆菌的筛选
3.2 产ESBLs阳性菌株和阴性菌株的耐药性比较
3.3 大肠杆菌ESBLs和AmpC耐药基因流行情况
第三部分 全文结论
参考文献
附录
致谢
本文编号：3759523
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文献综述
1 文献综述
1.1 大熊猫肠道菌群简介
1.2 耐药大肠杆菌的研究现状
1.3 大肠杆菌耐β-内酰胺类药物的耐药机制研究
1.4 大肠杆菌产ESBLs菌株耐药基因的传播机制
1.5 ESBLs和AmpC酶的检测
1.5.1 产ESBLs酶的表型鉴定方法
1.5.2 产AmpC酶的表型筛选
1.6 质粒ESBLs和AmpC酶基因的分子生物学检测方法
2 选题目的及意义
第二部分 试验研究
第一章 大熊猫粪便及环境中大肠杆菌耐药性监测
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样本的采集及质控菌株
1.1.2 主要药物
1.1.3 培养基
1.1.4 其他试剂
1.1.5 主要仪器和设备
1.2 方法
1.2.1 大肠杆菌的分离和纯化
1.2.2 大肠杆菌的鉴定
1.2.3 大肠杆菌菌株的保存
1.2.4 纸片扩散法检测菌株的药物敏感性
1.2.5 药敏结果的判断
1.2.6 数据分析
2 结果与分析
2.1 不同样本大肠杆菌的分离及鉴定结果
2.2 96株分离自大熊猫粪便大肠杆菌对药物的耐药情况
2.2.1 96株分离自大熊猫粪便大肠杆菌对药物的耐药率
2.2.2 粪便源大肠杆菌对药物的多重耐药
2.2.3 粪便源菌株对不同抗菌药物的交叉耐药性
2.3 29株分离自环境大肠菌对药物的耐药情况
2.3.1 29株环境源菌株对抗菌药物的耐药率
2.3.2 多重耐药
2.3.3 环境源菌株对不同抗菌药物的交叉耐药性
2.4 不同来源菌株对抗菌药物耐药性比较
2.4.1 不同来源菌株耐药率比较
2.4.2 不同来源菌株的多重耐药性比较
3 讨论
3.1 不同样本大肠杆菌菌株的分离情况
3.2 粪便源菌株对不同抗菌药物的耐药情况
3.2.1 96株粪便源大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药率
3.2.2 粪便源大肠杆菌的多重耐药性分析
3.2.3 粪便源大肠杆菌的交叉耐药性
3.3 环境源大肠杆菌的耐药性分析
3.3.1 29株环境源大肠杆菌的耐药性监测
3.3.2 29株环境源大肠杆菌的多重耐药性监测
3.3.3 环境源大肠杆菌的交叉耐药性
4 小结
第二章 大肠杆菌产ESBLs和AmpC酶及其基因型的检测
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
1.1.2 药敏纸片
1.1.3 培养基
1.1.4 其他试剂
1.1.5 主要仪器和设备
1.2 方法
1.2.1 大肠杆菌产ESBLs的初步筛选
1.2.2 大肠杆菌AmpC酶的初步筛选
1.2.3 产ESBLs和AmpC酶菌株质粒DNA的提取及电泳检测
1.2.4 大肠杆菌质粒ESBLs和AmpC酶的基因型检测
1.2.5 基因测序
1.2.6 数据分析
2 结果
2.1 产ESBLs和AmpC酶大肠杆菌的筛选
2.1.1 粪便源大肠杆菌产ESBLs酶菌株的筛选
2.1.2 环境源大肠杆菌产ESBLs酶菌株的筛选
2.1.3 产AmpC酶大肠杆菌的筛选
2.2 产ESBLs大肠杆菌的耐药性分析
2.3 ESBLs基因和AmpC酶基因检测
2.3.1 ESBLs基因的PCR扩增结果
2.3.2 AmpC酶基因的PCR扩增结果
2.4 基因测序结果
3 讨论
3.1 产ESBLs和AmpC酶大肠杆菌的筛选
3.2 产ESBLs阳性菌株和阴性菌株的耐药性比较
3.3 大肠杆菌ESBLs和AmpC耐药基因流行情况
第三部分 全文结论
参考文献
附录
致谢
本文编号：3759523
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3759523.html
