鸡胚发育过程N-Cadherin在中枢神经系统中的表达模式和功能调控

发布时间：2023-03-19 19:35

　　胚胎发育过程中枢神经系统的发育存在大量神经元的形成和迁移，而神经元形成和迁移受到众多分子的调控，其中细胞粘附分子钙粘蛋白家族成员发挥重要作用。神经钙粘蛋白(N-Cadherin)最初在鸡胚神经管中被发现，是钙粘蛋白家族成员之一，在中枢神经系统发育过程中扮演重要角色。在中枢神经系统形成过程新生细胞向神经元分化或新生神经元迁移异常会导致神经系统发育异常，因此，研究导致神经元分化或迁移异常的分子机制成为发育神经生物学研究的热点。本研究以N-Cadherin为关键分子，通过活体电转基因技术，实现鸡胚发育过程N-Cadherin在中枢神经系统中的异常表达，分析其异常表达后对轴突形成和神经元迁移的影响，进一步探讨N-Cadherin在神经系统发育过程中的功能调控。研究结果如下： 1.成功建立了鸡胚的带壳培养和去壳培养方法，同时也建立和优化了活体电转基因技术，实现了目的基因在脊髓和视顶盖中的表达，该方法适用于脊髓最佳转染时间在E2.5-E3(HH stage18-24)，视顶盖最佳转染时间在E5(HH stage27)，脊髓转染阳性表达率达到54.5%，视顶盖转染阳性表达率达到60%，完全可以达到实...

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
综述部分
    第一章 钙粘蛋白研究进展
        1.1 钙粘蛋白的发现
        1.2 钙粘蛋白的分类
            1.2.1 经典钙粘蛋白
            1.2.2 原钙粘蛋白
        1.3 钙粘蛋白研究进展
            1.3.1 经典钙粘蛋白研究进展
            1.3.2 原钙粘蛋白研究进展
        1.4 钙粘蛋白在中枢神经系统中的功能
            1.4.1 经典钙粘蛋白在中枢神经系统中的功能
            1.4.2 原钙粘蛋白在中枢神经系统中的功能
        1.5 钙粘蛋白研究展望
        1.6 小结
实验研究
    第二章 鸡胚培养及活体电转基因技术的建立
        2.1 材料和方法
            2.1.1 材料与仪器
            2.1.2 方法
        2.2 结果
            2.2.1 鸡胚胎培养
            2.2.2 活体电转基因技术
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 鸡胚活体原位电转基因技术对不同启动子及报告基因 GFP 表达的质量评估
        3.1 材料和方法
            3.1.1 材料与仪器
            3.1.2 方法
        3.2 结果
            3.2.1 三种质粒启动子的生物信息学分析
            3.2.2 鸡胚发育过程三种质粒表达强度差异分析
            3.2.3 组织切片上对 3 种不同质粒在脊髓中表达强度的分析
            3.2.4 各组间鸡胚胎发育形态结构的比较
            3.2.5 GFP 表达对α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
            3.2.6 GFP 表达对神经丝蛋白表达的影响
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 N-Cadherin 真核表达载体的筛选及其在 293T 细胞中表达效率的分析
        4.1 材料和方法
            4.1.1 材料与仪器
            4.1.2 方法
        4.2 结果
            4.2.1 干扰载体的筛选
            4.2.2 N-Cadherin 的异常表达及其对细胞形态结构的影响
            4.2.3 N-Cadherin 的异常表达对 catenin 的调控
            4.2.4 N-Cadherin 的异常表达对细胞骨架蛋白的影响
            4.2.5 N-Cadherin 异常表达后细胞凋亡的检测
        4.3 讨论
        4.4 小结
    第五章 鸡胚发育过程 N-Cadherin 在中枢神经系统的表达模式
        5.1 材料和方法
            5.1.1 材料与仪器
            5.1.2 方法
        5.2 结果
            5.2.1 神经钙粘蛋白在脊髓中的表达
            5.2.2 神经丝蛋白在脊髓中的表达及其与 N-Cadherin 表达的异同
            5.2.3 神经钙粘蛋白在视顶盖中的表达模式
            5.2.4 神经丝蛋白在视顶盖中的表达模式及其与 N-Cadherin 表达的异同
        5.3 讨论
        5.4 小结
    第六章 鸡胚发育过程 N-Cadherin 异常表达对脊髓神经轴突投射的影响
        6.1 材料和方法
            6.1.1 材料
            6.1.2 方法
        6.2 结果
            6.2.1 N-Cadherin 在鸡胚脊髓中的超表达和下调表达
            6.2.2 全脊髓展开实验结果
            6.2.3 N-Cadherin 异常表达对脊髓中 catenin 表达的影响
            6.2.4 N-Cadherin 和β-catenin 异常表达对脊髓神经突起向对侧投射的影响
            6.2.5 脊髓中 N-Cadherin 异常表达对脊髓相关蛋白表达的影响
        6.3 讨论
        6.4 小结
    第七章 鸡胚发育过程 N-Cadherin 异常表达对视顶盖神经元迁移的影响
        7.1 材料与方法
            7.1.1 材料与仪器
            7.1.2 方法
        7.2 结果
            7.2.1 鸡胚视顶发育过程中神经元增殖、迁移和分层形成规律的研究
            7.2.2 N-Cadherin 在视顶盖中的超表达或下调表达
            7.2.3 N-Cadherin 在视顶盖中的超表达或下调表达对 NF 表达的影响
            7.2.4 N-Cadherin 在视顶盖中的超表达或下调表达对β-catenin 表达的影响
            7.2.5 N-Cadherin 在视顶盖中的超表达或下调表达对 Pax-7 表达的影响
        7.3 讨论
        7.4 小结
结论与创新点
参考文献
主要缩略词和中英文对照表（Abbreviation Index）
附录
致谢
作者简介



本文编号：3765832