以Ag@SiO 2 为载体新城疫纳米粒DNA疫苗的制备及其免疫效果研究
发布时间：2023-03-19 20:17
新城疫(Newcastle Disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus, NDV)引起的一种急性、烈性、高度接触性禽类传染病,是危害养禽业的严重疫病之一。预防ND有效的方法之一是免疫接种。常用的是ND弱毒苗和灭活苗,但ND弱毒苗和灭活苗在实际应用中均存在一定的局限性。ND灭活苗虽能够刺激机体产生细胞免疫和黏膜免疫,但两者作用都较弱,并伴有接种反应；ND弱毒苗易变异,产生返祖。DNA疫苗既有弱毒苗的优点,又有灭活苗的安全性,因此,成为了近年研究的热点。尽管DNA疫苗在许多方面都优于传统疫苗,但是其易被核酸酶降解,而应用可生物降解材料构建纳米粒黏膜免疫递送系统可避免DNA易降解、免疫次数多的弊端。本试验以自行合成的Ag@SiO2核壳纳米粒为载体,以新城疫病毒F基因pVAXl-optiF为模型药物,采用复凝聚法制备pFDNA-Ag@SiO2-NPs,并对pFDNA-Ag@SiO2-NPs理化特性、稳定性、细胞毒性和免疫效果等进行了较为详细的研究。试验结果表明：1)制备的pFDNA-Ag@SiO2-NPs形态规则、外形圆整、分散性好,平均粒径为511...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 新城疫概述
1.1.1 新城疫病毒概述
1.1.2 新城疫的诊断与控制
1.1.3 新城疫疫苗
1.2 基因递送载体
1.2.1 病毒载体
1.2.2 非病毒载体
1.3 无机纳米粒作为基因载体
1.3.1 羟基磷灰石纳米颗粒
1.3.2 磁性氧化铁颗粒
1.3.3 金纳米粒
1.3.4 二氧化硅纳米粒
1.4 黏膜免疫
1.4.1 黏膜免疫系统的组成和结构
1.4.2 黏膜疫苗免疫途径
1.4.3 禽黏膜免疫系统与疫苗免疫
1.5 本试验研究的目的意义及主要内容
1.5.1 本试验研究的目的意义
1.5.2 本试验研究的的主要内容
第2章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 质粒、细菌、细胞、病毒与疫苗载体
2.1.2 试验动物
2.1.3 主要生化与分子生物学试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 常用溶液的配制
2.2 试验方法
2.2.1 NDV pVAX1-optiF的提取
2.2.2 以Ag@SiO2为载体的新城疫纳米粒DNA疫苗的制备
2.2.3 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合分析
2.2.4 抑菌试验
2.2.5 pFDNA-Ag@SiO2-NPs形态、粒径分布和Zeta电位检测
2.2.6 pFDNA-Ag@SiO2-NPs包封率测定
2.2.7 pFDNA-Ag@SiO2-NPs抗DNase Ⅰ降解试验
2.2.8 pFDNA-Ag@SiO2-NPs体外释放试验
2.2.9 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外表达
2.2.10 pFDNA-Ag@SiO2-NPs安全性评价
2.2.11 pFDNA-Ag@SiO2-NPs贮藏稳定性
2.2.12 pFDNA-Ag@SiO2-NPs免疫效果评价
第3章 结果与分析
3.1 质粒pVAX1-optiF的鉴定
3.2 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的制备
3.2.1 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合
3.2.2 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合分析
3.3 抑菌试验
3.4 pFDNA-Ag@SiO2-NPs形态、粒径分布和Zeta电位检测
3.5 pFDNA-Ag@SiO2-NPs包封率的测定
3.6 pFDNA-Ag@SiO2-NPs抗DNase Ⅰ降解试验
3.7 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外释放试验
3.8 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外表达
3.9 pFDNA-Ag@SiO2-NPs安全性评价
3.9.1 细胞毒性检测
3.9.2 安全检验
3.10 pFDNA-Ag@SiO2-NPs贮藏稳定性
3.11 pFDNA-Ag@SiO2-NPs免疫效果评价
3.11.1 免疫鸡血清IgG抗体检测
3.11.2 免疫鸡黏膜提取液中IgA抗体检测
3.11.3 免疫鸡淋巴细胞增殖试验
3.11.4 鸡γ干扰素(IFN-γ)检测
3.11.5 鸡白介素2(IL-2)检测
3.11.6 鸡白介素4(IL-4)检测
3.11.7 攻毒试验
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 本论文的主要创新点
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
攻读硕士学位期间参与研究课题情况
本文编号：3765897
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【学位级别】：硕士
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中文摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 新城疫概述
1.1.1 新城疫病毒概述
1.1.2 新城疫的诊断与控制
1.1.3 新城疫疫苗
1.2 基因递送载体
1.2.1 病毒载体
1.2.2 非病毒载体
1.3 无机纳米粒作为基因载体
1.3.1 羟基磷灰石纳米颗粒
1.3.2 磁性氧化铁颗粒
1.3.3 金纳米粒
1.3.4 二氧化硅纳米粒
1.4 黏膜免疫
1.4.1 黏膜免疫系统的组成和结构
1.4.2 黏膜疫苗免疫途径
1.4.3 禽黏膜免疫系统与疫苗免疫
1.5 本试验研究的目的意义及主要内容
1.5.1 本试验研究的目的意义
1.5.2 本试验研究的的主要内容
第2章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 质粒、细菌、细胞、病毒与疫苗载体
2.1.2 试验动物
2.1.3 主要生化与分子生物学试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 常用溶液的配制
2.2 试验方法
2.2.1 NDV pVAX1-optiF的提取
2.2.2 以Ag@SiO2为载体的新城疫纳米粒DNA疫苗的制备
2.2.3 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合分析
2.2.4 抑菌试验
2.2.5 pFDNA-Ag@SiO2-NPs形态、粒径分布和Zeta电位检测
2.2.6 pFDNA-Ag@SiO2-NPs包封率测定
2.2.7 pFDNA-Ag@SiO2-NPs抗DNase Ⅰ降解试验
2.2.8 pFDNA-Ag@SiO2-NPs体外释放试验
2.2.9 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外表达
2.2.10 pFDNA-Ag@SiO2-NPs安全性评价
2.2.11 pFDNA-Ag@SiO2-NPs贮藏稳定性
2.2.12 pFDNA-Ag@SiO2-NPs免疫效果评价
第3章 结果与分析
3.1 质粒pVAX1-optiF的鉴定
3.2 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的制备
3.2.1 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合
3.2.2 氨基化Ag@SiO2核壳纳米粒与质粒DNA的结合分析
3.3 抑菌试验
3.4 pFDNA-Ag@SiO2-NPs形态、粒径分布和Zeta电位检测
3.5 pFDNA-Ag@SiO2-NPs包封率的测定
3.6 pFDNA-Ag@SiO2-NPs抗DNase Ⅰ降解试验
3.7 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外释放试验
3.8 pFDNA-Ag@SiO2-NPs的体外表达
3.9 pFDNA-Ag@SiO2-NPs安全性评价
3.9.1 细胞毒性检测
3.9.2 安全检验
3.10 pFDNA-Ag@SiO2-NPs贮藏稳定性
3.11 pFDNA-Ag@SiO2-NPs免疫效果评价
3.11.1 免疫鸡血清IgG抗体检测
3.11.2 免疫鸡黏膜提取液中IgA抗体检测
3.11.3 免疫鸡淋巴细胞增殖试验
3.11.4 鸡γ干扰素(IFN-γ)检测
3.11.5 鸡白介素2(IL-2)检测
3.11.6 鸡白介素4(IL-4)检测
3.11.7 攻毒试验
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 本论文的主要创新点
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
攻读硕士学位期间参与研究课题情况
本文编号：3765897
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