我国猪伪狂犬病病毒变异株全基因组序列分析及其gE/gI基因缺失灭活疫苗免疫特性

发布时间：2023-03-22 21:06

　　猪伪狂犬病(Pseudorabies, PR)是伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)引起的一种猪的重要传染病,主要临床症状包括：新生仔猪中枢神经系统紊乱、断奶仔猪和育肥猪表现出呼吸道症状、妊娠母猪繁殖障碍,给世界生猪养殖业带来巨大的经济损失。目前,防控伪狂犬病主要依靠疫苗免疫,美国与部分欧洲国家已宣布通过基因缺失疫苗免疫和净化技术,根除了该病在家猪中的流行。近30年来,我国广泛使用PRV基因缺失弱毒疫苗有效控制并逐步净化。但是,2011年以来,我国许多免疫PRV活疫苗的猪场出现仔猪神经症状及死亡,生长猪呼吸道症状并部分死亡,妊娠母猪流产、死胎、弱仔等疑似PR的临床症状。本研究在病原学调查基础上,从我国发病猪场分离获得5株PRV,并以PRVZJ01毒株为研究对象,系统地研究其毒力、抗原特性和基因组特征,并成功构建了ZJ01株的感染性细菌人工染色体克隆,获得ZJ01 gE/gI基因缺失病毒,观察其灭活疫苗免疫特性,为进一步开展PRV变异毒株进化机制和新型疫苗研究奠定基础。本研究内容分为以下5个部分：1.中国东南部猪伪狂犬病病毒超强毒株分离与鉴定伪狂犬病病毒是威胁养...

【文章页数】：150 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
综述部分
    第一章 伪狂犬病病毒分子病毒学及其免疫研究进展
        1 病原
            1.1 病毒理化特性
            1.2 病毒分子生物学特征
            1.3 流行病学
            1.4 病毒致病性
        2 防制
            2.1 PRV免疫
            2.2 PRV疫苗
    参考文献
研究部分
    第二章 我国猪伪狂犬病病毒超强毒株分离与鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 主要材料
            1.2 临床病料与血清样品
            1.3 病毒分离鉴定
            1.4 病毒滴度测定
            1.5 病毒粒子的电镜观察
            1.6 PRV gE与gC基因的PCR扩增、克隆与基因测序
            1.7 基因遗传进化树分析
            1.8 PRV gE与gC基因编码氨基酸序列比对分析
            1.9 PRV ZJ01动物感染试验
            1.10 PRV不同毒株毒力比较
            1.11 病理学观察
            1.12 组织中PRV DNA载量的检测
            1.13 PRV ELISA抗体检测
            1.14 数据分析
        2 结果
            2.1 临床观察与血清学调查
            2.2 病毒分离与鉴定
            2.3 病毒粒子形态
            2.4 gE和gC基因序列分析
            2.5 PRV ZJ01株动物感染试验结果
            2.6 毒力比较试验结果
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第三章 猪伪狂犬病病毒超强毒株ZJ01抗原特性鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒与细胞
            1.2 试剂
            1.3 病毒血清交叉中和试验
            1.4 PRV ZJ01株灭活疫苗制备
            1.5 仔猪免疫保护试验
            1.6 PRV ELISA抗体的检测
            1.7 PRV中和抗体的检测
            1.8 鼻腔排毒的检测
            1.9 脏器组织中PRV病毒载量的检测
            1.10 病理学观察
            1.11 统计学分析
        2 结果
            2.1 清病毒交叉中和试验
            2.2 猪体免疫试验结果
        3 讨论
        参考文献
        abstract
    第四章 猪伪狂犬病病毒超强毒株ZJ01全基因组序列测定与分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒
            1.2 试剂
            1.3 PRV ZJ01基因组DNA的提取与纯化
            1.4 Ion Torrent高通量测序
            1.5 序列的拼接与组装
            1.6 Gaps的填补
            1.7 PRV ZJ01全基因组序列PCR验证
            1.8 PRV ZJ01基因组RFLP验证
            1.9 PRV ZJ01基因注释及功能预测GC含量的计算
            1.10 进化树分析
            1.11 PRV gE与gC基因编码氨基酸序列比对分析
        2 结果与讨论
            2.1 PRV ZJ01 gDNA提取与纯化
            2.2 PRV ZJ01 基因组序列的测定
            2.3 PRV ZJ01 基因组的注释
            2.4 PRV ZJ01 编码蛋白的特点
            2.5 PRV ZJ01 基因组调控序列的分析
            2.6 基因序列进化分析
        参考文献
        abstract
    第五章 猪伪狂犬病病毒超强毒株ZJO1 BAC细菌人工染色体构建与鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒与细胞
            1.2 质粒与菌株
            1.3 工具酶与试剂
            1.4 病毒纯化与基因组提取
            1.5 引物设计与同源重组臂的PCR扩增
            1.6 转移载体的构建
            1.7 重组病毒拯救与噬斑纯化
            1.8 重组病毒vZJ01-GFP△gE/gI株BAC的克隆与鉴定
            1.9 pZJ01遗传稳定性
            1.10 gE/gI基因缺失病毒vZJ01△gE/gI的构建与鉴定
            1.11 无痕恢复病毒vZJ01gE/gI-R的构建与鉴定
            1.12 病毒体外增殖特征测定
            1.13 小鼠攻毒试验
            1.14 家兔攻毒试验
            1.15 仔猪攻毒试验
            1.16 统计学分析
        2 结果
            2.1 中间载体构建与鉴定
            2.2 转移载体构建与鉴定
            2.3 vZJ01-GFP△gE/gI重组病毒拯救与纯化
            2.4 PRV ZJ01 BAC克隆的筛选与鉴定
            2.5 PRV ZJ01 BAC克隆的遗传稳定性鉴定
            2.6 gE/gI基因缺失病毒vZJ01△gE/gI的构建与纯化
            2.7 无痕恢复病毒vZJ01gE/gI-R的构建与纯化
            2.8 重组病毒空斑形态观察
            2.9 病毒生长曲线
            2.10 小鼠攻毒试验结果
            2.11 家兔攻毒试验结果
            2.12 猪体攻毒试验结果
        3 讨论
        参考文献
        abstract
    第六章 猪伪狂犬病病毒超强毒ZJ01 gE/gI基因缺失株灭活疫苗免疫保护作用
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒与细胞
            1.2 试剂
            1.3 疫苗的准备
            1.4 仔猪免疫保护试验
            1.5 PRV ELISA抗体的检测
            1.6 PRV中和抗体的检测
            1.7 鼻腔排毒的检测
            1.8 脏器组织中PRV病毒载量的检测
            1.9 病理学观察
            1.10 统计学分析
        2 结果
            2.1 疫苗安全性
            2.2 免疫抗体测定结果
            2.3 攻毒保护试验结果
        3 讨论
        参考文献
        abstract
全文总结
致谢
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本文编号：3767580