A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒的开发

发布时间：2023-03-22 17:26

　　口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物产生急性高热等症状。该病感染能力强,传播途径多,在多个国家和地区发生过大流行,严重阻碍了畜牧业发展。口蹄疫病毒有7个血清型,分别为O、A、C、Asia 1、SAT 1-3型,每个血清型又包含多个亚型,各型之间不存在交叉反应。我国的主要流行血清型为A型、O型和Asia 1型。2009至2013年间,在我国上海、湖北、武汉、新疆阿克苏地区以及周边国家多次爆发A型口蹄疫疫情,给当地经济带来了巨大的损失。为建立一种有效检测A型FMD的方法,首先需获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白。经过PCR扩增得到A型FMDVvp1基因片段,与原核表达载体pET-28a连接,构建重组质粒pET-A-vp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE及Western-Blot分析表明,A-VP1重组蛋白分子质量约为29 ku,能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别,蛋白...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
第一部分 文献综述
    1 口蹄疫概述
        1.1 口蹄疫简介
        1.2 FMD的流行情况
    2 FMDV的分子生物学特性
        2.1 FMDV病原学特征
        2.2 FMDV基因组特征
        2.3 FMDV结构蛋白和功能
        2.4 FMDV VP1的意义
        2.5 FMDV非结构蛋白及其功能
        2.6 FMDV的感染机制
    3 FMD诊断技术研究进展
        3.1 FMDV分离鉴定
        3.2 血清学检测技术
        3.3 分子生物学检测技术
        3.4 ELISA在FMD中的应用
第二部分 A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1原核表达
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 菌株、血清
        2.2 主要试剂
        2.3 主要仪器和设备
        2.4 主要试剂的配制
        2.5 重组表达载体的构建与建立
        2.6 诱导表达
        2.7 可溶性分析
        2.8 重组A-VP1蛋白的纯化
        2.9 ELISA检测纯化A-VP1蛋白的活性
    3 结果与分析
        3.1 A-vp1基因的PCR扩增结果
        3.2 重组质粒的构建与鉴定结果
        3.3 表达产物SDS-PAGE鉴定
        3.4 表达产物Western-Blot鉴定
        3.5 重组蛋白的诱导表达优化结果
        3.6 重组蛋白的可溶性分析结果
        3.7 重组蛋白的纯化及复性结果
        3.8 ELISA检测复性蛋白的活性
    4 讨论
第三部分 A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测试剂盒的开发
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试剂及血清
        2.2 A-VP1蛋白临床检测应用初步鉴定
        2.3 间接ELISA试剂盒的研制及初步应用
    3 结果
        3.1 A-VP1蛋白鉴定结果
        3.2 抗原最佳包被量的确定
        3.3 血清和酶标抗体的工作浓度
        3.4 最佳抗原包被液的确定
        3.5 最佳封闭时间的确定
        3.6 最佳血清作用时间的确定
        3.7 最佳酶标二抗作用时间的确定
        3.8 底物作用时间确定
        3.9 判定标准确定
        3.10 特异性和敏感性
        3.11 重复性试验
        3.12 对比试验
        3.13 保质期试验
        3.14 试剂盒的组成及说明书
    4 讨论
第四部分 全文总结
参考文献
Abstract



本文编号：3767287