四川部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及其弱毒株的培育

发布时间：2023-03-24 04:06

　　鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌属中的一种或几种沙门氏菌引起的一类急性或慢性疾病的总称,包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒。临床上以败血症和肠炎最为常见。本病在世界各地普遍存在,它不仅严重危害养鸡业的发展,而且还可以通过禽产品进入食物链,并严重威胁到人类的健康,是一种人畜共患的传染病。长期以来,在我国的大部分鸡场中都是通过采用抗菌药物来防治此病的。由于抗菌药物的不合理使用,已造成了沙门氏菌耐药性的不断增强,甚至还表现出多重耐药性,如此使得防治该病变得极其困难。近些年,国外许多国家已经使用疫苗对禽类进行免疫并取得了较好的效果。本试验对四川省7个地区26个鸡场中的108份病料进行了沙门氏菌分离与鉴定,并对其流行株进行了弱毒株培育、弱毒疫苗制备等研究,旨在为该地区鸡沙门氏菌病的流行病学调查、疫苗预防和治疗提供参考资料。采用沙门氏菌选择性培养基,分别对来自26个养鸡场的108份病料进行细菌分离,并对分离菌进行形态学观察、PCR检测、生化鉴定、血清型鉴定、药敏试验和致病性试验。结果显示,从108份病料中鉴定出了28株沙门氏菌,分离率为25.9%,其中有9株符合鸡白痢沙门氏菌的生化特性,19株菌符合鸡伤寒沙门氏...

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中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一部分 文献综述
    1 前言
    2 病原学
        2.1 病原分类
        2.2 形态特征
        2.3 生长特性
        2.4 生化特性
        2.5 抵抗力
        2.6 抗原结构
            2.6.1 O抗原
            2.6.2 H抗原
            2.6.3 Vi抗原
        2.7 抗原变异性
            2.7.1 H-O变异
            2.7.2 S-R变异
            2.7.3 位相变异
        2.8 毒力测定方法
            2.8.1 最小致死量
            2.8.2 半数致死量
    3 鸡沙门氏菌病的特点
        3.1 流行病学特点
        3.2 临床症状
            3.2.1 鸡白痢
            3.2.2 鸡伤寒
            3.2.3 鸡副伤寒
        3.3 病理变化
    4 沙门氏菌减毒研究进展
        4.1 化学诱变减毒
        4.2 抗生素诱导减毒
        4.3 基因工程减毒
    5 预防和控制
        5.1 管理措施
            5.1.1 净化鸡群
            5.1.2 严格隔离消毒制度
        5.2 疫苗免疫
        5.3 药物防治
    6 研究目的与意义
第二部分 试验研究
    第一章 鸡沙门氏菌的分离鉴定
        1 材料
            1.1 病料
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂
            1.4 培养基及用途
            1.5 引物
            1.6 沙门氏菌属诊断血清
            1.7 试验动物
        2 方法
            2.1 细菌的分离
            2.2 PCR检测
                2.2.1 PCR模板制备
                2.2.2 PCR扩增
            2.3 生化试验
            2.4 血清学试验
                2.4.1 菌液制备
                2.4.2 血清型鉴定
            2.5 药物敏感性试验
            2.6 致病性试验
            2.7 沙门氏菌分离鉴定情况统计
        3 结果与分析
            3.1 细菌的分离
            3.2 目的片段PCR扩增
            3.3 生化试验
            3.4 血清型鉴定
            3.5 药敏试验
            3.6 致病性试验
            3.7 鸡沙门氏菌分离鉴定情况统计
        4 讨论
        5 小结
    第二章 鸡伤寒沙门氏菌弱毒株的培育
        1 材料
            1.1 菌株
            1.2 主要仪器
            1.3 试剂
            1.4 培养基
            1.5 诱变剂的配制
                1.5.1 0.1M亚硝酸钠溶液
                1.5.2 1M pH4.4醋酸缓冲液
            1.6 试验动物
        2 方法
            2.1 出发菌株的筛选
                2.1.1 细菌毒力检测
                2.1.2 免疫原性检测
            2.2 弱毒株的培育
                2.2.1 菌悬液制备
                2.2.2 紫外线诱变法
                2.2.3 亚硝酸诱变法
                2.2.4 紫外线-亚硝酸复合诱变法
                2.2.5 初步筛选弱毒株
                2.2.6 毒力检测
                2.2.7 传代培养
            2.3 弱毒株特性的检测
                2.3.1 菌落形态特征
                2.3.2 生化特性
                2.3.3 毒力
                2.3.4 稳定性
                2.3.5 免疫原性
        3 结果与分析
            3.1 出发菌株的筛选
                3.1.1 细菌毒力检测
                3.1.2 免疫原性检测
            3.2 弱毒株的培育
                3.2.1 紫外线诱变法
                3.2.2 亚硝酸诱变法
                3.2.3 紫外线-亚硝酸复合诱变法
                3.2.4 初步筛选弱毒株
                3.2.5 毒力检测
                3.2.6 传代培养菌的检测
            3.3 弱毒株特性的检测
                3.3.1 菌落形态特征
                3.3.2 生化特性
                3.3.3 毒力
                3.3.4 稳定性
                3.3.5 免疫原性
        4 讨论
        5 小结
    第三章 鸡伤寒沙门氏菌弱毒疫苗的研制及其指标检验
        1 材料
            1.1 菌株
            1.2 主要仪器
            1.3 试剂
            1.4 培养基
            1.5 耐热冻干保护剂
                1.5.1 配方
                1.5.2 配制方法
            1.6 试验动物
        2 方法
            2.1 种子液制备
            2.2 疫苗用菌液制备
            2.3 配苗、分装及冻干
                2.3.1 耐热冻干保护剂疫苗浓度的筛选
                2.3.2 耐热冻干保护剂与菌体感作时间的筛选
                2.3.3 耐热冻干保护剂疫苗分装量的筛选
            2.4 成品疫苗检验
                2.4.1 物理性状
                2.4.2 活菌计数
                2.4.3 贮藏与有效期检验
                2.4.4 安全性检验
                2.4.5 最适免疫剂量检验
                2.4.6 免疫保护期检验
                2.4.7 疫苗菌体内清除时间检验
                2.4.8 免疫鸡增重情况检验
                2.4.9 交叉保护试验
        3 结果与分析
            3.1 配苗、分装及冻干
                3.1.1 耐热冻干保护剂疫苗浓度的筛选
                3.1.2 耐热冻干保护剂与菌体感作时间的筛选
                3.1.3 耐热冻干保护剂疫苗分装量的筛选
            3.2 成品疫苗检验
                3.2.1 物理性状
                3.2.2 活菌计数
                3.2.3 贮藏与有效期检验
                3.2.4 安全性检验
                3.2.5 最适免疫剂量检验
                3.2.6 免疫保护期检验
                3.2.7 疫苗菌体内清除时间检验
                3.2.8 免疫鸡增重情况检验
                3.2.9 交叉保护试验
        4 讨论
        5 小结
第三部分 参考文献
致谢



本文编号：3769410