兔原始生殖细胞体外培养的研究

发布时间：2023-03-25 00:25

　　旨在探索兔原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)体外分离培养的最佳条件,从而建立成熟稳定的兔PGCs体外分离培养方法。本研究首先通过两种不同的体外分离法(胰酶消化法、机械法)和3种不同的传代法(胰酶消化法、机械法、连同饲养层消化法)探索第14～18天胎兔的PGCs体外分离传代的最佳方式,另将培养液分为A、B、C、D 4组,以D组为对照组,探究不同细胞因子浓度对兔PGCs形态变化及集落形成的影响。其次,利用碱性磷酸酶染色(alkaline phosphatase staining, AKP)法对兔PGCs进行鉴定染色;实时荧光定量(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测转录因子Oct-4的表达。结果表明,机械法分离得到的兔PGCs集落数量是酶消化法分离的2.2倍,而兔PGCs经不同的消化法传代发现,酶消化法、连同饲养层消化法、机械法在兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast, REF)饲养层上分别成功传至P2、P2、P4代。B组PGCs培养液(基础液+10%胎牛血清(fetal...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验动物
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 REF的分离培养与饲养层的制备
    1.4 酶消化法和机械法两种不同分离方法对兔PGCs的影响
    1.5 不同传代方法对兔PGCs的影响
    1.6 兔PGCs的鉴定
        1.6.1 形态学鉴定
        1.6.2 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase staining, AKP)染色鉴定
        1.6.3 RT-PCR鉴定
    1.7 细胞因子对兔PGCs分离培养的影响
    1.8 统计学分析
2 结 果
    2.1 REF的生物学特性
    2.2 兔PGCs生长行为观察
    2.3 AKP染色鉴定兔PGCs
    2.4 RT-PCR检测兔PGCs集落中转录因子Oct-4的表达
    2.5 胰酶消化法和机械法两种不同分离方法对兔PGCs体外培养的影响
    2.6 不同传代方法对兔PGCs体外培养的影响
    2.7 不同浓度细胞因子对兔PGCs体外培养的影响
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3770155