牛支原体表面膜蛋白vpmaX粘附特性的研究

发布时间：2023-03-25 07:40

　　牛支原体(Mycoplasma bovis, M. bovis)属于柔膜体纲,支原体目微生物。能够引起犊牛肺炎,关节炎,乳房炎等多种疾病。自2008年首次从湖北省病牛身上分离到M. bovis以来,全国多个省市地区就不断有M. bovis病例的报道,现今牛支原体在我国已成普遍感染状态,牛支原体也已经成为威胁我国养牛业的重要病原之一。 病原体对宿主的粘附是病原体感染的第一步,是支原体致病机理研究的一个重要方面。近年来,支原体粘附蛋白的研究取得了较大进展,但主要集中在引起人类传染病的肺炎支原体和无乳支原体中。本研究在M. bovis Hubei-1株全基因组测序的基础上,根据生物信息学,选取了一个690bp的vpmaX基因,重点研究其可能具有的粘附特性。 Hubei-1vpmaX大小为690bp,编码一个25kDa的蛋白vpmaX。该蛋白在GeneBank中被命名为"variable surface lipoprotein A",但其与牛支原体标准株PG45中Vsp (variable surface lipoproteins, Vsp)家族成员的VspA绝然不同。序列分析显示vpmaX氨...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 牛支原体(Mycoplasma bovis)概述
        1.1.1 牛支原体(Mycoplasma bovis)简介
        1.1.2 牛支原体相关疾病
        1.1.3 牛支原体感染的诊断
    1.2 牛支原体粘附因子的研究
    1.3 牛支原体表面脂蛋白及Vsp家族蛋白的研究
    1.4 本研究的目的与意义
第二章 vpmaX的序列分析及原核表达
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、载体
        2.1.2 主要试剂及试剂盒
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 主要溶液及配置方法
    2.2 方法
        2.2.1 序列分析及比对
        2.2.2 M.bovis培养及基因组提取
        2.2.3 M.bovis Hubei-1 vpmaX克隆
        2.2.4 pET28a-vpmaX重组质粒构建及鉴定
        2.2.5 重组质粒pET28a-vpmaX的诱导及表达
        2.2.6 rvpmaX的纯化
    2.3 结果
        2.3.1 vpmaX及其基因的生物信息学分析
        2.3.2 pET28a-vpmaX重组质粒构建及鉴定
        2.3.3 rvmaX的表达与纯化
    2.4 小结
    2.5 讨论
第三章 vpmaX的膜定位实验
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 菌株和血清
        3.1.3 实验仪器及设备
        3.1.4 相关溶液及配制方法
    3.2 方法
        3.2.1 兔抗rvpmaX抗体的制备
        3.2.2 兔抗vpmaX血清效价的测定
        3.2.3 vpmaX在M.bovis上的定位实验
    3.3 结果
        3.3.1 兔抗rvpmaX抗体效价的测定
        3.3.2 vpmaX在M.bovis上的定位实验
    3.4 小结
    3.5 讨论
第四章 vpmaX粘附特性的鉴定
    4.1 材料
        4.1.1 菌株与细胞
        4.1.2 试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 方法
        4.2.1 rvpmaX粘附EBL细胞
        4.2.2 夹心ELISA实验
    4.3 结果
        4.3.1 rvpmaX粘附EBL细胞
        4.3.2 夹心ELISA实验结果
    4.4 小结
    4.5 讨论
第五章 vpmaX抗原变异的研究
    5.1 材料
        5.1.1 菌株
        4.1.2 试剂
        4.1.3 实验设备及仪器
    5.2 方法
        5.2.1 M.bovis Hubei-1抗体压力下的培养
        5.2.2 M.bovis Hubei-1抗体压力下vpmaX表达的变化
    5.3 结果
    5.4 小结
    5.5 讨论
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3770829