LHR/PRLR和GH/IGF-1基因在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达与定位

发布时间：2023-03-26 12:13

　　睾丸发育和精子发生在哺乳动物体中是受多基因调控的复杂过程;睾丸发育和精子发生过程是否正常直接关系到精液品质的好坏,而精液品质则直接影响雄性动物的繁殖性能。研究报道促黄体素受体、催乳素受体基因在哺乳动物生殖发育中扮演重要角色,广泛存在于各种组织。但现有研究主要集中在雌性动物的卵巢和子宫等生殖器官上,对雄性动物睾丸中表达的研究少之甚少。而GH和IGF-1基因是动物生长轴上的关键基因,因此,大量研究主要集中在提高动物生长速度和产肉性能上,对繁殖性能的研究相对较少。但LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在雄性动物精子发生和睾丸发育及其功能维持方面具有重要作用,而在青藏高原特有畜种牦牛睾丸不同发育阶段上的研究仍处于空白阶段。因而探究LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在牦牛睾丸发育中的调控作用,对揭示公牦牛精子发生和睾丸功能维持的分子调控机制具有重大意义。本研究分别采集幼年期(6月龄)、初情期(24月龄)、性成熟期(36月龄)、成年期(72月龄)牦牛睾丸组织和公牦牛肾脏、肝脏、肺脏、心脏、脾脏、骨骼肌、皮下脂肪等器官组织为试验材料,每个组织分别采集5头。对LHR、PRLR、GH、IGF-1基...

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摘要
Summary
缩略词中英文对照表
第一章 文献综述
    1 睾丸的组织结构和精子发生
        1.1 睾丸的组织结构
        1.2 精子发生过程
    2 相关基因的国内外研究进展
        2.1 LHR的结构与研究进展
        2.2 PRLR的结构与研究进展
        2.3 GH的结构与研究进展
        2.4 IGF-1 的结构与研究进展
    3 研究的目的与意义
第二章 试验研究
    试验一 LHR、PRLR基因在牦牛不同发育时期睾丸中的表达与定位
        1 材料与方法
            1.1 试验动物
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 试验方法
                1.3.1 组织样采集
                1.3.2 总RNA的提取
                1.3.3 第一链c DNA合成
                1.3.4 引物设计及合成
                1.3.5 常规逆转录PCR(reversetranscriptionpoly-merasechain reaction,RT-PCR)检测
                1.3.6 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)
                1.3.7 睾丸组织石蜡切片的制备
                1.3.8 免疫组织化学染色
                1.3.9 数据统计与结果分析
            1.4 主要生物学数据库和生物学软件
        2 结果与分析
            2.1 睾丸和不同器官组织总RNA的提取
            2.2 LHR和 PRLR基因的PCR扩增
            2.3 内参基因、目的基因扩增产物特异性分析
            2.4 LHR、PRLR基因在牦牛不同发育时期睾丸组织的差异表达
            2.5 LHR、PRLR基因在牦牛不同器官中的表达差异
            2.6 LHR和 PRLR蛋白在不同发育时期的免疫组化
        3 讨论
            3.1 LHR、PRLR基因在不同发育时期牦牛睾丸组织的表达差异
            3.2 LHR、PRLR基因在成年期牦牛不同器官组织中的表达差异
            3.3 LHR、PRLR蛋白在不同发育期牦牛睾丸组织中的定位
    试验二 GH、IGF-1 基因在不同发育时期牦牛睾丸中的表达与定位
        1 材料与方法
            1.1 试验动物
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 试验方法
                1.3.1 组织样采集
                1.3.2 总RNA的提取
                1.3.3 第一链c DNA合成
                1.3.4 引物设计及合成
                1.3.5 常规RT-PCR检测
                1.3.6 半定量PCR
                1.3.7 qRT-PCR
                1.3.8 总蛋白提取与变性
                1.3.9 Western blot
                1.3.10 免疫组织化学染色
                1.3.11 数据统计与结果分析
            1.4 主要生物学数据库和生物学软件
        2 结果与分析
            2.1 GH、IGF-1 基因的PCR扩增
            2.2 GH、IGF-1 基因在牦牛睾丸组织和不同器官组织中半定量PCR分析
            2.3 实时荧光定量PCR扩增产物特异性分析
            2.4 GH、IGF-1 基因在牦牛不同发育时期睾丸组织的差异表达
            2.5 GH、IGF-1 基因在牦牛不同器官中的表达差异
            2.6 GH、IGF-1 蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达
            2.7 GH、IGF-1 蛋白在不同发育时期牦牛睾丸中的免疫组化
        3 讨论
            3.1 GH、IGF-1 基因在不同发育时期牦牛睾丸组织的表达差异
            3.2 GH、IGF-1 基因在性成熟期牦牛不同器官组织中的表达差异
            3.3 GH、IGF-1 蛋白在不同发育期牦牛睾丸组织中的定位
第三章 结论
本研究的创新点
本研究的不足之处
参考文献
附录
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3770934