鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的制备及其免疫胶体金检测试纸条研制
发布时间：2023-03-27 02:15
鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种重要的细菌性致病菌,可引起雏鸭感染发病或死亡。已报道的鸭疫里默氏杆菌血清型有21种,其中血清1、2、10型是国内优势血清型。外膜蛋白A(OmpA)是鸭疫里默氏杆菌的重要免疫原性蛋白,在不同血清型中保守性良好。为制备鸭疫里默氏杆菌的免疫胶体金检测试纸条,本研究选用OmpA蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体。将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合后,用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,经腹腔注射BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过单克隆抗体效价及稳定性测定,秋水仙素法进行杂交瘤细胞的染色体分析以及Western blot法鉴定单克隆抗体特异性,共获得3株稳定分泌抗鸭疫里默氏杆菌OmpA的单克隆抗体,分别命名为2D5、2A6、4H8。3株单克隆抗体亚型均鉴定为IgG2a,腹水效价均测定为1:2048000;3株单克隆抗体均与鸭疫里默氏杆菌血清1型RA-CH3株、血清2型RA-NJ3株和血清10型RA-HXb2株发生特异性反应,与大肠杆菌、沙门菌和多杀性巴氏杆菌等其他禽致病菌不发生交叉反应,表明本研究...
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 鸭疫里默氏杆菌及其流行病学
1.1.1 鸭疫里默氏杆菌概述
1.1.2 流行病学
1.1.3 鸭疫里默氏杆菌的毒力因子
1.2 鸭疫里默氏杆菌检测技术的研究
1.2.1 血清学诊断方法
1.2.2 分子生物学检测技术
1.3 免疫胶体金快速检测技术的概述
1.3.1 胶体金的概述
1.3.2 免疫胶体金的概述
1.3.3 免疫胶体金检测技术
1.3.4 胶体金免疫层析法
1.3.5 胶体金免疫层析技术的应用
1.4 目的和意义
第二章 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的制备
2.1 材料
2.1.1 菌株、实验动物及细胞系
2.1.2 主要仪器设备及试剂
2.1.3 所需溶液配制
2.1.4 实验引物设计
2.2 方法
2.2.1 小鼠免疫
2.2.2 骨髓瘤细胞准备
2.2.3 脾淋巴细胞的准备
2.2.4 饲养细胞的制备
2.2.5 细胞融合
2.2.6 杂交瘤细胞的筛选及亚克隆
2.2.7 杂交瘤细胞株的亚型鉴定
2.2.8 鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体腹水的制备
2.2.9 鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的鉴定
2.2.10 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体腹水的纯化
2.3 结果
2.3.1 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的制备及鉴定
2.3.2 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体亚型鉴定
2.3.3 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体腹水效价
2.3.4 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的染色体分析
2.3.5 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体特异性
2.3.6 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的纯化
2.4 讨论
小结
第三章 鸭疫里默氏杆菌免疫胶体金检测试纸条的研制
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 主要仪器与试剂
3.1.3 培养基与缓冲液配制
3.2 方法
3.2.1 金溶液的制备及鉴定
3.2.2 胶体金标记蛋白的标记条件摸索及鉴定
3.2.3 反应体系的组合筛选
3.2.4 免疫胶体金试纸条组装及反应条件优化
3.2.5 免疫胶体金试纸条的性状评价
3.3 结果
3.3.1 金溶液的制备及鉴定
3.3.2 胶体金标记蛋白的标记条件摸索及鉴定
3.3.3 反应条件的优化
3.3.4 免疫胶体金试纸条的性状评价
3.4 讨论
小结
第四章 鸭疫里默氏杆菌免疫胶体金检测试剂条的临床应用
4.1 材料
4.1.1 菌株及实验动物
4.1.2 主要仪器及材料
4.2 方法
4.2.1 实验感染鸭的样品检测
4.2.2 临床动物样品检测
4.3 结果
4.3.1 实验感染鸭的样品检测
4.3.2 临床样品检测
4.4 讨论
小结
第五章 全文总结
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3772178
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 鸭疫里默氏杆菌及其流行病学
1.1.1 鸭疫里默氏杆菌概述
1.1.2 流行病学
1.1.3 鸭疫里默氏杆菌的毒力因子
1.2 鸭疫里默氏杆菌检测技术的研究
1.2.1 血清学诊断方法
1.2.2 分子生物学检测技术
1.3 免疫胶体金快速检测技术的概述
1.3.1 胶体金的概述
1.3.2 免疫胶体金的概述
1.3.3 免疫胶体金检测技术
1.3.4 胶体金免疫层析法
1.3.5 胶体金免疫层析技术的应用
1.4 目的和意义
第二章 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的制备
2.1 材料
2.1.1 菌株、实验动物及细胞系
2.1.2 主要仪器设备及试剂
2.1.3 所需溶液配制
2.1.4 实验引物设计
2.2 方法
2.2.1 小鼠免疫
2.2.2 骨髓瘤细胞准备
2.2.3 脾淋巴细胞的准备
2.2.4 饲养细胞的制备
2.2.5 细胞融合
2.2.6 杂交瘤细胞的筛选及亚克隆
2.2.7 杂交瘤细胞株的亚型鉴定
2.2.8 鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体腹水的制备
2.2.9 鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的鉴定
2.2.10 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体腹水的纯化
2.3 结果
2.3.1 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的制备及鉴定
2.3.2 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体亚型鉴定
2.3.3 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体腹水效价
2.3.4 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的染色体分析
2.3.5 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体特异性
2.3.6 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体的纯化
2.4 讨论
小结
第三章 鸭疫里默氏杆菌免疫胶体金检测试纸条的研制
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 主要仪器与试剂
3.1.3 培养基与缓冲液配制
3.2 方法
3.2.1 金溶液的制备及鉴定
3.2.2 胶体金标记蛋白的标记条件摸索及鉴定
3.2.3 反应体系的组合筛选
3.2.4 免疫胶体金试纸条组装及反应条件优化
3.2.5 免疫胶体金试纸条的性状评价
3.3 结果
3.3.1 金溶液的制备及鉴定
3.3.2 胶体金标记蛋白的标记条件摸索及鉴定
3.3.3 反应条件的优化
3.3.4 免疫胶体金试纸条的性状评价
3.4 讨论
小结
第四章 鸭疫里默氏杆菌免疫胶体金检测试剂条的临床应用
4.1 材料
4.1.1 菌株及实验动物
4.1.2 主要仪器及材料
4.2 方法
4.2.1 实验感染鸭的样品检测
4.2.2 临床动物样品检测
4.3 结果
4.3.1 实验感染鸭的样品检测
4.3.2 临床样品检测
4.4 讨论
小结
第五章 全文总结
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3772178
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3772178.html
