多聚免疫球蛋白受体（pIgR）影响猪流行性腹泻病毒复制的分子机理
发布时间：2023-03-28 23:38
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起哺乳仔猪严重腹泻甚至死亡的高度接触性肠道冠状病毒,对当前新生仔猪健康造成了严重的威胁。PEDV主要通过靶向入侵猪肠道中肠绒毛上皮细胞,破坏其粘膜免疫系统屏障而引起仔猪发病。分泌型免疫球蛋白(sIgs)介导的粘膜免疫应答在控制PEDV感染过程中发挥着重要的作用,而sIgs的分泌主要取决于多聚免疫球蛋白受体(p IgR),因此,探究pIgR在病毒感染复制过程中的作用,对解析PEDV的致病机理具有重要价值。sIgs主要依赖p IgR分泌至肠腔以抵御肠道病原微生物的入侵。为了解p IgR在PEDV感染后的表达情况,我们在前期PEDV FJzz1株感染试验的基础上,选取PEDV感染组与正常对照组试验仔猪的不同肠段,检测各肠段中p IgR的mRNA变化情况。结果显示,与正常对照组相比,PEDV感染组仔猪不同肠段内pIgR的mRNA水平均显著增加,表明PEDV感染后显著上调宿主体内p IgR的转录。在体外,我们将PEDV FJzz1株感染宿主细胞LLC-PK1分析了pIg R表达变化。结果显示,F...
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 猪流行性腹泻简介
1.1.1 猪流行性腹泻病毒基因组及病毒结构
1.1.2 猪流行性腹泻病毒侵染细胞的过程
1.1.3 PEDV与粘膜免疫
1.2 多聚免疫球蛋白受体
1.2.1 pIgR基本结构与功能
1.2.2 pIgR表达的调节通路
1.2.3 pIgR在病原感染中的作用
1.3 研究目的与意义
第二章 pIgR对 PEDV体外增殖的影响
2.1 材料
2.1.1 病毒、抗体、细胞、质粒和菌株
2.1.2 感染仔猪小肠组织和实验动物
2.1.3 主要试剂
2.2 试验方法
2.2.1 病毒感染与组织处理
2.2.2 总RNA的提取
2.2.3 反转录
2.2.4 相对荧光定量PCR检测
2.2.5 pIgR表达载体的构建
2.2.6 SDS-PAGE电泳及Western blot
2.2.7 pIgR多抗的制备与鉴定
2.2.8 过表达pIgR对 PEDV增殖的影响
2.2.9 敲低内源性pIgR对 PEDV增殖的影响
2.2.10 pIgR缺失细胞系的构建
2.2.11 缺失pIgR对PEDV增殖的影响
2.2.12 数据分析
2.3 结果
2.3.1 猪源pIgR基因的扩增
2.3.2 pIgR基因的序列分析
2.3.3 pIgR编码蛋白的抗原性分析
2.3.4 pIgR的原核表达、纯化与pIgR多克隆抗体的制备
2.3.5 p3×FLAG-pIgR真核表达质粒的构建及表达鉴定
2.3.6 pIgR多抗的IFA鉴定
2.3.7 pIgR多抗的Western Blot鉴定
2.3.8 pIgR在 PEDV感染仔猪肠组织中的表达变化
2.3.9 PEDV感染宿主细胞pIgR表达变化
2.3.10 PEDV感染Vero细胞pIgR表达变化
2.3.11 过量表达pIgR可促进PEDV增殖
2.3.12 敲低内源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.3.13 pIgR缺失细胞系的构建
2.3.14 缺失内源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.4 讨论
第三章 PEDV调控pIgR表达的分子途径初步研究
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒与细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.1.4 引物设计
3.1.5 荧光定量PCR检测
3.1.6 Western blot分析
3.2 结果与分析
3.2.1 PEDV感染后参与调控pIgR表达相关分子转录水平变化
3.2.2 TNF-α呈剂量依赖性促进pIgR表达
3.2.3 PEDV对 NF-κB途径的影响
3.2.4 泛素蛋白酶体抑制剂MG132 处理对pIgR表达的影响
3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3773524
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 绪论
1.1 猪流行性腹泻简介
1.1.1 猪流行性腹泻病毒基因组及病毒结构
1.1.2 猪流行性腹泻病毒侵染细胞的过程
1.1.3 PEDV与粘膜免疫
1.2 多聚免疫球蛋白受体
1.2.1 pIgR基本结构与功能
1.2.2 pIgR表达的调节通路
1.2.3 pIgR在病原感染中的作用
1.3 研究目的与意义
第二章 pIgR对 PEDV体外增殖的影响
2.1 材料
2.1.1 病毒、抗体、细胞、质粒和菌株
2.1.2 感染仔猪小肠组织和实验动物
2.1.3 主要试剂
2.2 试验方法
2.2.1 病毒感染与组织处理
2.2.2 总RNA的提取
2.2.3 反转录
2.2.4 相对荧光定量PCR检测
2.2.5 pIgR表达载体的构建
2.2.6 SDS-PAGE电泳及Western blot
2.2.7 pIgR多抗的制备与鉴定
2.2.8 过表达pIgR对 PEDV增殖的影响
2.2.9 敲低内源性pIgR对 PEDV增殖的影响
2.2.10 pIgR缺失细胞系的构建
2.2.11 缺失pIgR对PEDV增殖的影响
2.2.12 数据分析
2.3 结果
2.3.1 猪源pIgR基因的扩增
2.3.2 pIgR基因的序列分析
2.3.3 pIgR编码蛋白的抗原性分析
2.3.4 pIgR的原核表达、纯化与pIgR多克隆抗体的制备
2.3.5 p3×FLAG-pIgR真核表达质粒的构建及表达鉴定
2.3.6 pIgR多抗的IFA鉴定
2.3.7 pIgR多抗的Western Blot鉴定
2.3.8 pIgR在 PEDV感染仔猪肠组织中的表达变化
2.3.9 PEDV感染宿主细胞pIgR表达变化
2.3.10 PEDV感染Vero细胞pIgR表达变化
2.3.11 过量表达pIgR可促进PEDV增殖
2.3.12 敲低内源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.3.13 pIgR缺失细胞系的构建
2.3.14 缺失内源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.4 讨论
第三章 PEDV调控pIgR表达的分子途径初步研究
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒与细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.1.4 引物设计
3.1.5 荧光定量PCR检测
3.1.6 Western blot分析
3.2 结果与分析
3.2.1 PEDV感染后参与调控pIgR表达相关分子转录水平变化
3.2.2 TNF-α呈剂量依赖性促进pIgR表达
3.2.3 PEDV对 NF-κB途径的影响
3.2.4 泛素蛋白酶体抑制剂MG132 处理对pIgR表达的影响
3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3773524
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3773524.html
