咖啡酸对脂多糖激活的bMEC和RAW264.7 Nox-ROS信号的调节作用
发布时间：2023-03-29 18:15
咖啡酸(caffeicacid,CA)在药用植物(菊科、蔷薇科、无患子科等)中含量丰富,是一类天然的酚类化合物,具有抗炎、抗氧化作用。奶牛乳腺上皮细胞(bovine marmmary epithelial cells,bMEC)是乳汁合成、分泌的重要功能单位,是乳腺生长发育及泌乳功能调控机制研究的主要细胞模型,在奶牛乳房炎过程中易受损害。前期研究表明CA可以抑制脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)引起的bMEC结构损伤。巨噬细胞参与机体内非特异性与特异性免疫,乳房炎发生时,在递呈抗原与趋化中性粒细胞时,启动炎症反应。本研究在前期建立的LPS诱导bMEC结构损伤模型的基础上,给予Nox(non-phagocyticcelloxidase)抑制剂(DPI)、ROS清除剂(NAC)处理来探讨Nox-ROS信号在LPS诱导bMEC损伤和小鼠巨噬细胞系(RAW 264.7)炎症、氧化应激反应中的作用,及CA对该信号的调节机制。本研究将bMEC、RAW 264.7分别分为空白对照组(Con)、模型组(Mod)、ROS 清除剂组(NAC+LPS)、Nox 抑制剂(DPI+LPS)...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
第一章 文献综述
1 奶牛乳房炎的危害
2 奶牛乳房炎的病因
2.1 自身与环境因素
2.2 热应激和冷应激
2.3 病原微生物
3 奶牛乳腺的免疫防御机制
3.1 乳头导管的机械屏障
3.2 巨噬细胞与嗜中性粒细胞
3.3 淋巴细胞与树突状细胞
3.4 乳腺上皮细胞与成纤维细胞
3.5 体液免疫
3.5.1 乳铁蛋白与补体
3.5.2 溶菌酶与细胞因子
4 奶牛乳房炎的防治
4.1 抗生素疗法
4.2 中草药防治奶牛乳房炎
4.3 中西医结合防治奶牛乳房炎
5 咖啡酸的抗炎抗氧化作用
6 脂多糖的危害
第二章 原代奶牛乳腺上皮细胞的制备
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 主要实验器材
1.3 主要实验试剂
1.4 实验方法
1.4.1 乳腺组织分离
1.4.2 bMEC生长及纯化过程
1.4.3 bMEC生长曲线的测定
1.4.4 bMEC角蛋白的鉴定
1.4.5 bMEC冻存、复苏与传代培养
1.5 数据分析
2 结果
2.1 一步胶原酶消化法培养上皮细胞各个时期的生长情况
2.2 细胞角蛋白18鉴定的结果
2.3 bMEC生长曲线
3 讨论
4 小结
第三章 CA对LPS激活的bMEC Nox-ROS信号的影响
1 材料与方法
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验方法
1.3.1 bMEC的传代培养
1.3.2 细胞内ROS含量的检测
1.3.3 细胞线粒体膜电位的检测
1.3.4 细胞凋亡的检测
1.3.5 NF-κB、Nrf2信号通路关键蛋白的检测
1.3.6 p65与Nrf2核移位的检测
1.3.7 细胞炎性因子表达的检测
1.3.8 细胞MDA含量和SOD活性的检测
1.4 数据分析
2 结果
2.1 CA对LPS诱导的bMEC ROS含量的影响
2.2 CA对LPS诱导的细胞线粒体膜电位的保护作用
2.2.1 LPS作用不同时间对细胞线粒体膜电位的影响
2.2.2 CA对LPS诱导bMEC 12 h线粒体膜电位的影响
2.3 CA对LPS诱导的bMEC凋亡的影响
2.4 CA对LPS诱导的bMEC NF-κB、Nrf2信号通路中关键蛋白的影响
2.5 CA对LPS诱导的bMEC p65和Nrf2核移位的影响
2.6 CA对LPS诱导的bMEC炎性因子表达的影响
2.7 CA对LPS诱导的bMEC MDA含量和SOD活性的影响
3 讨论
4 小结
第四章 CA对LPS激活的RAW 264.7 Nox-ROS信号的影响
1 材料与方法
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.2.1 主要试剂
1.2.2 主要试剂配置
1.3 实验方法
1.3.1 RAW 264.7复苏、冻存与传代
1.3.2 细胞内ROS含量的检测
1.3.3 细胞线粒体膜电位的检测
1.3.4 细胞凋亡的检测
1.3.5 NF-κB和Nrf2关键蛋白的检测
1.3.6 p65和Nrf2核移位的检测
1.3.7 炎性因子表达的检测
1.3.8 细胞MDA含量和SOD活性的检测
1.4 数据分析
2 结果
2.1 CA对LPS诱导的RAW 264.7的ROS含量的影响
2.2 CA对LPS诱导的细胞线粒体膜电位的影响
2.2.1 LPS作用RAW 264.7不同时间线粒体膜电位的影响
2.2.2 CA对LPS诱导的RAW 264.7 12 h线粒体膜电位的影
2.3 CA对LPS诱导的RAW 264.7 12 h凋亡的影响
2.4 CA对LPS诱导的RAW 264.7 NF-κB、Nrf2信号通路中关键蛋白的影响
2.5 CA对LPS诱导的RAW 264.7 p65和Nrf2核移位的影响
2.6 CA对LPS诱导的RAW 264.7炎性因子表达的影响
2.7 CA对LPS诱导的RAW264.7 MDA含量和SOD活性的作用
3 讨论
4 小结
结论
参考文献
致谢
本文编号：3774235
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
第一章 文献综述
1 奶牛乳房炎的危害
2 奶牛乳房炎的病因
2.1 自身与环境因素
2.2 热应激和冷应激
2.3 病原微生物
3 奶牛乳腺的免疫防御机制
3.1 乳头导管的机械屏障
3.2 巨噬细胞与嗜中性粒细胞
3.3 淋巴细胞与树突状细胞
3.4 乳腺上皮细胞与成纤维细胞
3.5 体液免疫
3.5.1 乳铁蛋白与补体
3.5.2 溶菌酶与细胞因子
4 奶牛乳房炎的防治
4.1 抗生素疗法
4.2 中草药防治奶牛乳房炎
4.3 中西医结合防治奶牛乳房炎
5 咖啡酸的抗炎抗氧化作用
6 脂多糖的危害
第二章 原代奶牛乳腺上皮细胞的制备
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 主要实验器材
1.3 主要实验试剂
1.4 实验方法
1.4.1 乳腺组织分离
1.4.2 bMEC生长及纯化过程
1.4.3 bMEC生长曲线的测定
1.4.4 bMEC角蛋白的鉴定
1.4.5 bMEC冻存、复苏与传代培养
1.5 数据分析
2 结果
2.1 一步胶原酶消化法培养上皮细胞各个时期的生长情况
2.2 细胞角蛋白18鉴定的结果
2.3 bMEC生长曲线
3 讨论
4 小结
第三章 CA对LPS激活的bMEC Nox-ROS信号的影响
1 材料与方法
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验方法
1.3.1 bMEC的传代培养
1.3.2 细胞内ROS含量的检测
1.3.3 细胞线粒体膜电位的检测
1.3.4 细胞凋亡的检测
1.3.5 NF-κB、Nrf2信号通路关键蛋白的检测
1.3.6 p65与Nrf2核移位的检测
1.3.7 细胞炎性因子表达的检测
1.3.8 细胞MDA含量和SOD活性的检测
1.4 数据分析
2 结果
2.1 CA对LPS诱导的bMEC ROS含量的影响
2.2 CA对LPS诱导的细胞线粒体膜电位的保护作用
2.2.1 LPS作用不同时间对细胞线粒体膜电位的影响
2.2.2 CA对LPS诱导bMEC 12 h线粒体膜电位的影响
2.3 CA对LPS诱导的bMEC凋亡的影响
2.4 CA对LPS诱导的bMEC NF-κB、Nrf2信号通路中关键蛋白的影响
2.5 CA对LPS诱导的bMEC p65和Nrf2核移位的影响
2.6 CA对LPS诱导的bMEC炎性因子表达的影响
2.7 CA对LPS诱导的bMEC MDA含量和SOD活性的影响
3 讨论
4 小结
第四章 CA对LPS激活的RAW 264.7 Nox-ROS信号的影响
1 材料与方法
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.2.1 主要试剂
1.2.2 主要试剂配置
1.3 实验方法
1.3.1 RAW 264.7复苏、冻存与传代
1.3.2 细胞内ROS含量的检测
1.3.3 细胞线粒体膜电位的检测
1.3.4 细胞凋亡的检测
1.3.5 NF-κB和Nrf2关键蛋白的检测
1.3.6 p65和Nrf2核移位的检测
1.3.7 炎性因子表达的检测
1.3.8 细胞MDA含量和SOD活性的检测
1.4 数据分析
2 结果
2.1 CA对LPS诱导的RAW 264.7的ROS含量的影响
2.2 CA对LPS诱导的细胞线粒体膜电位的影响
2.2.1 LPS作用RAW 264.7不同时间线粒体膜电位的影响
2.2.2 CA对LPS诱导的RAW 264.7 12 h线粒体膜电位的影
2.3 CA对LPS诱导的RAW 264.7 12 h凋亡的影响
2.4 CA对LPS诱导的RAW 264.7 NF-κB、Nrf2信号通路中关键蛋白的影响
2.5 CA对LPS诱导的RAW 264.7 p65和Nrf2核移位的影响
2.6 CA对LPS诱导的RAW 264.7炎性因子表达的影响
2.7 CA对LPS诱导的RAW264.7 MDA含量和SOD活性的作用
3 讨论
4 小结
结论
参考文献
致谢
本文编号：3774235
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3774235.html
