PRRSV诱导炎症反应及其调控机制

发布时间：2023-04-01 03:54

　　猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,主要表现为母猪严重的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病和生长受阻。PRRSV为单股正链RNA病毒,自20世纪80年代末爆发以来,PRRSV已经严重威胁到了全球养猪业的发展,并且造成了巨大的经济损失。自1995年我国报道发生该病以来,该病己成为困扰我国养猪生产中最重要的病毒性传染病之一。特别是2006年在我国出现的高致病性蓝耳病,导致全国各地大批生猪死亡,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV感染猪可以引起强烈的间质性肺炎,提示我们炎症反应在PRRSV感染和致病性方面扮演着十分重要的角色。然而,目前对这种毒株感染后引起宿主细胞的信号转导机制知之甚少。针对这种新的PRRSV,本文开展了对其诱导宿主细胞产生炎症反应信号转导机制的研究,为阐明PRRSV的致病机理以及其新型疫苗的研制提供理论依据。具体研究内容包括： 1.高致病性PRRSV感染激活IL-1β的分子机制及其生物学意义的研究 IL-1β是一种主要由单核细胞、巨噬细胞和淋巴细胞产生的促炎性细胞因子,是机体调节免疫和炎症反应的中心...

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【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
第1章 文献综述
    1.1 炎症反应
        1.1.1 炎症反应机制
        1.1.2 炎症小体
        1.1.3 NLRP3炎症小体
        1.1.4 炎症反应的重要核心—1L-1β
        1.1.5 IL-6
        1.1.6 IL-8
        1.1.7 Toll样受体与炎症反应
        1.1.8 TLR4与炎症反应
        1.1.9 RIG-Ⅰ样受体与炎症反应
        1.1.10 ROS与炎症反应
        1.1.11 K⁺外流(K⁺ effflux)与炎症反应
    1.2 PRRSV与炎症反应
        1.2.1 PRRSV
        1.2.2 PRRSV诱导的炎症反应
        1.2.3 PRRSV编码的蛋白诱导的炎症反应
        1.2.4 PRRSV诱导炎症反应的分子机制
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 细胞、毒株与菌株
        3.1.2 工具酶及主要试剂
        3.1.3 Western Blot所需材料
        3.1.4 培养基与抗生素及其配制
        3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制
        3.1.6 主要实验仪器及设备
        3.1.7 分子生物学分析软件
    3.2 试验方法
        3.2.1 PRRSV的增殖
        3.2.2 病毒滴度的测定
        3.2.3 RNA的提取及RT-PCR扩增目的片段
        3.2.4 siRNA转染(脂质体介导转染法)
        3.2.5 Western Blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达
        3.2.6 SYBR Green Ⅰ实时定量PCR
        3.2.7 相对mRNA表达水平的计算
        3.2.8 ELISA检测细胞因子表达量
        3.2.9 双荧光素酶检测实验
        3.2.10 PRRSV的间接免疫荧光(IFA)验证
        3.2.11 DAPI染色
        3.2.12 激光共聚焦显微镜观察
        3.2.13 统计学方法
第4章 结果与分析
    4.1 高致病性PRRSV感染激活IL-1β的分子机制及其生物学意义研究
        4.1.1 PRRSV在PAM细胞中的感染动力学分析
        4.1.2 PRRSV感染显著激活IL-1β
        4.1.3 PRRSV感染激活IL-1β上游信号通路的研究
        4.1.4 NLRP3炎症小体参与PRRSV感染诱导IL-1β的成熟与分泌
        4.1.5 ROS和K⁺外流参与PRRSV感染诱导IL-1β的成熟与分泌
        4.1.6 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路参与PRRSV诱导NLRP3炎症小体各元件的表达
        4.1.7 PRRSV诱导IL-1β的生物学意义
    4.2 PRRSV激活IL-6的分子机制研究
        4.2.1 PRRSV感染显著激活IL-6
        4.2.2 PRRSV感染激活IL-6上游信号通路的研究
        4.2.3 NLRP3炎症小体参与PRRSV感染诱导IL-6的成熟与分泌
        4.2.4 ROS和K⁺外流参与PRRSV感染诱导IL-6的分泌
        4.2.5 猪源IL-6蛋白不影响PRRSV在PAM细胞中的增殖
    4.3 PRRSV激活IL-8的分子机制研究
        4.3.1 PRRSV感染显著激活IL-8
        4.3.2 PRRSV感染激活IL-8上游信号通路的研究
        4.3.3 NLRP3炎症小体参与PRRSV感染诱导IL-8的成熟与分泌
        4.3.4 ROS和K⁺外流参与PRRSV感染诱导IL-8的分泌
        4.3.5 猪源IL-8蛋白不影响PRRSV在PAM细胞中的增殖
第5章 讨论与结论
    5.1 讨论
        5.1.1 PRRSV激活IL-1β的分子机制及其生物学意义研究
        5.1.2 PRRSV激活IL-6,IL-8的分子机制研究
    5.2 结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：3776411