与IBDV VP2、VP3相互作用宿主细胞蛋白的筛选及鉴定
发布时间：2023-04-01 14:01
传染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)引起的雏鸡的一种急性、高度接触性、致死性传染病。该病的病原IBDV主要侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊,造成其免疫抑制。IBDV属于双RNA病毒科,禽双RNA病毒属。IBDV基因组由A、B两段双链RNA分子组成,A节段全长约为3200bp,B节段全长约为2800bp。VP2和VP3是IBDV的结构蛋白,占病毒蛋白总量的90%以上。VP2是病毒衣壳的唯一组分,是病毒的主要宿主保护性抗原,是病毒细胞嗜性、毒力的重要分子基础。VP3也是IBDV的重要结构蛋白,与VP1、pVP2及病毒RNA均存在相互作用,它是病毒核糖核蛋白复合物(RNP)的成分,在病毒的组装过程中起脚手架作用。传染病的发生是病原和宿主相互博弈的结果,从病毒和宿主及其相互作用的角度来研究,可以更加全面的揭示IBDV侵染的分子机制。有研究发现,一些宿主天然免疫分子、限制因子及其信号通路在IBDV的侵染过程发挥重要作用,然而,全面彻底地揭示IBDV与宿主的相互作...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 IBDV
1.1.1 IBDV病原学
1.1.2 IBDV基因组
1.2 IBDV基因组的编码蛋白
1.3 IBDV与宿主细胞相互作用研究进展
1.4 蛋白质相互作用研究方法
1.4.1 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)
1.4.2 GST pull-down实验
1.4.3 酵母双杂交
1.4.4 蛋白质芯片技术
1.4.5 噬菌体展示技术
1.5 宿主蛋白CK1α
1.5.1 CK1α的结构与功能
1.5.2 CK1α与病毒的相互作用研究进展
1.6 核糖体蛋白L4(RPL4)的结构及功能
1.7 本研究的目的和意义
第二章 IBDV结构蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的筛选
2.1 材料和方法
2.1.1 菌株、毒株、质粒和细胞
2.1.2 主要试剂、耗材和仪器
2.1.3 应用IP技术筛选与IBDV VP2相互作用的宿主细胞蛋白
2.1.4 IBDV VP3基因的克隆
2.1.5 应用IP技术筛选与IBDV VP3相互作用的宿主细胞蛋白
2.1.6 互作蛋白质谱鉴定
2.2 实验结果
2.2.1 与IBDV VP2相互作用宿主细胞蛋白的筛选
2.2.2 IBDV VP3基因的克隆
2.2.3 与IBDV VP3相互作用宿主细胞蛋白的筛选
2.3 讨论
第三章 IBDV VP3蛋白与宿主细胞蛋白RPL4相互作用验证
3.1 材料和方法
3.1.1 菌株、质粒与细胞
3.1.2 主要试剂和仪器
3.1.3 鸡源核糖体蛋白L4基因(RPL4)的扩增及克隆
3.1.4 不同物种RPL4的同源性比较
3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
3.1.6 激光共聚焦
3.2 实验结果
3.2.1 鸡源RPL4基因的扩增、克隆及序列分析
3.2.2 免疫共沉淀(co-IP)实验结果
3.2.3 激光共聚焦实验结果
3.3 讨论
第四章 IBDV VP2蛋白与宿主蛋白CK1α相互作用验证
4.1 材料和方法
4.1.1 菌株、质粒与细胞
4.1.2 主要试剂、仪器
4.1.3 鸡源CK1α基因的扩增及克隆
4.1.4 不同物种CK1α的同源性比较
4.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
4.1.6 激光共聚焦
4.1.7 CK1α与VP2相互作用区域的确定
4.2 实验结果
4.2.1 鸡源CK1α基因的扩增、克隆及序列分析
4.2.2 免疫共沉淀(co-IP)实验结果
4.2.3 激光共聚焦实验结果
4.3 讨论
第五章 CK1α对传染性法氏囊病病毒复制影响的初步研究
5.1 材料和方法
5.1.1 病毒、细胞
5.1.2 主要试剂、仪器
5.1.3 D4476对DF1细胞活性的影响
5.1.4 CK1α功能抑制对IBDV的影响
5.2 实验结果
5.2.1 D4476对DF1细胞活性的影响
5.2.2 CK1α功能抑制后细胞中病毒蛋白含量上调
5.3 讨论
第六章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3777269
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 IBDV
1.1.1 IBDV病原学
1.1.2 IBDV基因组
1.2 IBDV基因组的编码蛋白
1.3 IBDV与宿主细胞相互作用研究进展
1.4 蛋白质相互作用研究方法
1.4.1 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)
1.4.2 GST pull-down实验
1.4.3 酵母双杂交
1.4.4 蛋白质芯片技术
1.4.5 噬菌体展示技术
1.5 宿主蛋白CK1α
1.5.1 CK1α的结构与功能
1.5.2 CK1α与病毒的相互作用研究进展
1.6 核糖体蛋白L4(RPL4)的结构及功能
1.7 本研究的目的和意义
第二章 IBDV结构蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的筛选
2.1 材料和方法
2.1.1 菌株、毒株、质粒和细胞
2.1.2 主要试剂、耗材和仪器
2.1.3 应用IP技术筛选与IBDV VP2相互作用的宿主细胞蛋白
2.1.4 IBDV VP3基因的克隆
2.1.5 应用IP技术筛选与IBDV VP3相互作用的宿主细胞蛋白
2.1.6 互作蛋白质谱鉴定
2.2 实验结果
2.2.1 与IBDV VP2相互作用宿主细胞蛋白的筛选
2.2.2 IBDV VP3基因的克隆
2.2.3 与IBDV VP3相互作用宿主细胞蛋白的筛选
2.3 讨论
第三章 IBDV VP3蛋白与宿主细胞蛋白RPL4相互作用验证
3.1 材料和方法
3.1.1 菌株、质粒与细胞
3.1.2 主要试剂和仪器
3.1.3 鸡源核糖体蛋白L4基因(RPL4)的扩增及克隆
3.1.4 不同物种RPL4的同源性比较
3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
3.1.6 激光共聚焦
3.2 实验结果
3.2.1 鸡源RPL4基因的扩增、克隆及序列分析
3.2.2 免疫共沉淀(co-IP)实验结果
3.2.3 激光共聚焦实验结果
3.3 讨论
第四章 IBDV VP2蛋白与宿主蛋白CK1α相互作用验证
4.1 材料和方法
4.1.1 菌株、质粒与细胞
4.1.2 主要试剂、仪器
4.1.3 鸡源CK1α基因的扩增及克隆
4.1.4 不同物种CK1α的同源性比较
4.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
4.1.6 激光共聚焦
4.1.7 CK1α与VP2相互作用区域的确定
4.2 实验结果
4.2.1 鸡源CK1α基因的扩增、克隆及序列分析
4.2.2 免疫共沉淀(co-IP)实验结果
4.2.3 激光共聚焦实验结果
4.3 讨论
第五章 CK1α对传染性法氏囊病病毒复制影响的初步研究
5.1 材料和方法
5.1.1 病毒、细胞
5.1.2 主要试剂、仪器
5.1.3 D4476对DF1细胞活性的影响
5.1.4 CK1α功能抑制对IBDV的影响
5.2 实验结果
5.2.1 D4476对DF1细胞活性的影响
5.2.2 CK1α功能抑制后细胞中病毒蛋白含量上调
5.3 讨论
第六章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3777269
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3777269.html
