冠状病毒N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制研究
发布时间：2023-04-01 18:17
冠状病毒(Coronavirus,CoV)属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒亚科,可分为α、β、γ、δ四个属,其中α、β冠状病毒主要感染哺乳动物,γ-冠状病毒主要感染鸟类,δ-冠状病毒既可以感染鸟类,也可以感染哺乳动物。自2003年严重急性呼吸综合征(Severe acute respiratory syndrome,SARS)爆发以来,对冠状病毒的研究受到高度重视。近年来,不断有新的冠状病毒被发现,如2012年出现的中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV),2014年在美国爆发的猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV);而且,随着环境条件变化或免疫压力等因素的影响,一些老的冠状病毒也发生了变异,导致新的变异毒株出现和流行,如2010年底在我国大流行的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株。这些新发与再现的冠状病毒,给人类和动物健康造成构成了巨大...
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 抗病毒天然免疫概述
1.1.1 抗病毒天然免疫简介
1.1.2 天然免疫的模式识别受体
1.1.3 RNA病毒诱导I型干扰素产生的信号通路
1.1.4 I型干扰素诱导的信号转导
1.2 病毒蛋白拮抗干扰素应答的机制
1.2.1 病毒蛋白拮抗I型干扰素表达
1.2.2 病毒蛋白拮抗I型干扰素信号转导
1.3 冠状病毒的研究进展
1.3.1 冠状病毒分类
1.3.2 冠状病毒基因组结构和复制
1.3.3 冠状病毒与天然免疫
1.3.4 猪流行性腹泻病毒的流行特征
1.3.5 鼠肝炎病毒和呼吸道冠状病毒的流行特征
1.3.6 猪δ冠状病毒的流行特征
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 毒株与菌株
3.1.2 细胞及转染相关材料
3.1.3 载体与质粒
3.1.4 工具酶、抗体及主要化学试剂
3.1.5 细胞培养基及其配置
3.1.6 主要缓冲液及其配置
3.1.7 主要实验仪器及设备
3.1.8 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 表达质粒构建
3.2.2 VSV-GFP和仙台病毒的增殖
3.2.3 RNA的提取及实时荧光定量RT-PCR
3.2.4 双荧光素酶检测实验
3.2.5 Western blot及Co-IP实验
3.2.6 间接免疫荧光实验与激光共聚焦显微镜观察
3.2.7 RNA结合实验
3.2.8 统计学方法
第4章 结果与分析
4.1 PEDV N蛋白拮抗IFN-β产生
4.1.1 PEDV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β表达
4.1.2 PEDV N蛋白抑制IRF3的活性
4.1.3 TBK1可能是PEDV N蛋白潜在的靶标
4.1.4 PEDV N蛋白能与TBK1发生相互作用
4.1.5 PEDV N蛋白阻碍了IRF3与TBK1之间的相互作用
4.2 MHV和SARS-CoV N蛋白拮抗IFN-β产生
4.2.1 MHV和SARS-CoV N蛋白没有靶向TBK1
4.2.2 MHV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β表达
4.2.3 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT激活的RIG-I/MDA5诱导IFN-β产生活性
4.2.4 MHV和SARS-CoV N蛋白能与PACT发生相互作用
4.2.5 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT结合RIG-I/MDA5
4.2.6 MHV和SARS-CoV N蛋白结合PACT是依赖RNA的
4.2.7 PEDV和PRRSV N蛋白不能拮抗PACT
4.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制
4.3.1 PDCoV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β产生
4.3.2 PDCoV N蛋白抑制IRF3活性
4.3.3 PDCoV N蛋白抑制SEV诱导的RIG-I/MDA5活性
4.3.4 PDCoV N蛋白能够与RIG-I发生相互作用且不依赖RNA
4.3.5 PDCoV N蛋白能与RIG-I的Hel和CTD结构域发生相互作用
4.3.6 PDCoV N蛋白抑制poly(I:C)和PACT结合RIG-I
4.3.7 PDCoV N蛋白的NTD结构域发挥抑制IFN-β功能
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 PEDV N蛋白抑制IFN-β产生产生的分子机制初步研究
5.1.2 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制初步研究
5.1.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制研究
5.1.4 冠状病毒编码的蛋白抑制IFN-β产生的规律
5.2 结论
参考文献
致谢
附录
本文编号：3777624
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 抗病毒天然免疫概述
1.1.1 抗病毒天然免疫简介
1.1.2 天然免疫的模式识别受体
1.1.3 RNA病毒诱导I型干扰素产生的信号通路
1.1.4 I型干扰素诱导的信号转导
1.2 病毒蛋白拮抗干扰素应答的机制
1.2.1 病毒蛋白拮抗I型干扰素表达
1.2.2 病毒蛋白拮抗I型干扰素信号转导
1.3 冠状病毒的研究进展
1.3.1 冠状病毒分类
1.3.2 冠状病毒基因组结构和复制
1.3.3 冠状病毒与天然免疫
1.3.4 猪流行性腹泻病毒的流行特征
1.3.5 鼠肝炎病毒和呼吸道冠状病毒的流行特征
1.3.6 猪δ冠状病毒的流行特征
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 毒株与菌株
3.1.2 细胞及转染相关材料
3.1.3 载体与质粒
3.1.4 工具酶、抗体及主要化学试剂
3.1.5 细胞培养基及其配置
3.1.6 主要缓冲液及其配置
3.1.7 主要实验仪器及设备
3.1.8 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 表达质粒构建
3.2.2 VSV-GFP和仙台病毒的增殖
3.2.3 RNA的提取及实时荧光定量RT-PCR
3.2.4 双荧光素酶检测实验
3.2.5 Western blot及Co-IP实验
3.2.6 间接免疫荧光实验与激光共聚焦显微镜观察
3.2.7 RNA结合实验
3.2.8 统计学方法
第4章 结果与分析
4.1 PEDV N蛋白拮抗IFN-β产生
4.1.1 PEDV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β表达
4.1.2 PEDV N蛋白抑制IRF3的活性
4.1.3 TBK1可能是PEDV N蛋白潜在的靶标
4.1.4 PEDV N蛋白能与TBK1发生相互作用
4.1.5 PEDV N蛋白阻碍了IRF3与TBK1之间的相互作用
4.2 MHV和SARS-CoV N蛋白拮抗IFN-β产生
4.2.1 MHV和SARS-CoV N蛋白没有靶向TBK1
4.2.2 MHV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β表达
4.2.3 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT激活的RIG-I/MDA5诱导IFN-β产生活性
4.2.4 MHV和SARS-CoV N蛋白能与PACT发生相互作用
4.2.5 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT结合RIG-I/MDA5
4.2.6 MHV和SARS-CoV N蛋白结合PACT是依赖RNA的
4.2.7 PEDV和PRRSV N蛋白不能拮抗PACT
4.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制
4.3.1 PDCoV N蛋白抑制SEV诱导的IFN-β产生
4.3.2 PDCoV N蛋白抑制IRF3活性
4.3.3 PDCoV N蛋白抑制SEV诱导的RIG-I/MDA5活性
4.3.4 PDCoV N蛋白能够与RIG-I发生相互作用且不依赖RNA
4.3.5 PDCoV N蛋白能与RIG-I的Hel和CTD结构域发生相互作用
4.3.6 PDCoV N蛋白抑制poly(I:C)和PACT结合RIG-I
4.3.7 PDCoV N蛋白的NTD结构域发挥抑制IFN-β功能
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 PEDV N蛋白抑制IFN-β产生产生的分子机制初步研究
5.1.2 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制初步研究
5.1.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β产生的分子机制研究
5.1.4 冠状病毒编码的蛋白抑制IFN-β产生的规律
5.2 结论
参考文献
致谢
附录
本文编号：3777624
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3777624.html
